白刺的原生质体制备与培养摘要：以西伯利亚白刺幼苗子叶为材料，采用L9(34)正交试验，比较酶组合、渗稳剂甘露醇浓度、酶解温度和酶解时间对其原生质体制备的影响。试验结果表明，适宜酶解条件为1%纤维素酶0nozukaR-10+0.2%果胶酶Y-23+0.8mol?L-l甘露醇，28€下酶解3.5h。而且，经过预处理的子叶，其原生质体得率优于未处理的。在MS+2,4-D1mg?L-l+6-BA0.5mg?L-l+0.7mol?L-l甘露醇的固液双层培养基中，原生质体能形成细胞团。关键词：白刺；预处理；原生质体制备；原生质体培养；细胞团中图分类号：R285.1文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.l006-6500.2011.06.006ProtoplastPreparationandCultureofNitrariasibiricaPall・HUYan,GUOCheng-jin(CollegeofLifeScienee,TianjinNormalUniversity,Tianjin300387,China)Abstract:ThecotyledonsofNitrariasibiricaPall.wereusedasmaterialsinthiswork.Theeffectsofcombinationsofenzymemixture,theconcentrationofmannitol,thetemperatureandthetimeofenzymolysisontheprotoplastpreparationwerestudiedbyorthogonaldesignwithL9(34)・Theresultsshowedthattheoptimalpreparingconditionwasby1%cellulase(OnozukaR-10)+0.2%PectolyaseY-23+0.8mol?L-lmannitolfor3.5h’under28°C.However,underthesameconditions,moreprotoplastwouldbegetfromthecotyledonswhichhadbeentreatedbytissueculture.Besides,protoplastwereculturedinsolid-liquiddoubleMSmediumcontaining2,4-D1mg?L-l+6-BA0.5mg?L-l+0.7mol?L-lmannitol,andthendevelopedintocellcluster.Keywords:NitrariasibiricaPall.；pretreatment；protoplastpreparation；protoplastculture；cellcluster西伯利亚白刺(NitrariasibiricaPall.)隶属于痪藜科，白刺属。其浆果状核果又称卡密、沙樱桃、酸胖，熟时暗红色，含有大量红色色素，富含氨基酸、微量元素、黄酮、VC等各类生理活性物质。白刺果可药食两用，具有健脾胃、调经活血、降压等功效，可用于治疗消化不良、月经不调和高血压、头晕等症［1］。近年来，还发现白刺果油含有丰富的维生素E成分，具有较强抗氧化性作用［2］。西伯利亚白刺是丛状小灌木，匍匐地面生长［3］。它能生长在土壤含盐量2.5%〜3.15%、pH值>8的重盐碱土中，是重盐碱土指示植物。可固沙护坡、改良盐碱地绿化、观赏［4］。该植物的组织培养和快速繁殖己有报道［5-7］,而原生质体制备尚未见报道。白刺原生质体的高效制备对其诱变和细胞杂交育种及丰富原生质体技术等具较高的理论和实践意义。1材料和方法1.1试验材料西伯利亚白刺果实采自天津滨海新区大港马圈村盐碱地。1.2试验试剂MS培养基，6-BA,IBA,琼脂（天津市珠江卫生材料厂），甘露醇，果胶酶Y-23C北京鼎国生物技术有限责任公司），纤维素酶R-10>离析酶R-10（北京普博欣生物技术有限公司）。CPW溶液：KH2PO427.2mg?L-l>KN03101mg?L-l>MgSO4?7H2O246mg?L-l、KI0.16mg?L-l>CuS040.025mg?L-l、CaCI2?2H2O1480mg?L-lo所有化学试剂均为分析纯试剂。1.3试验仪器YXQG02手提式压力蒸汽消毒器（山东新华医疗器械厂），SW-CJ-2超净工作台（上海锦屏仪器仪表有限公司），Galen显微镜（Gambrige）,BS224S电子天平（Sartorius）,RZH-158A型人工气候培养箱（杭州汇尔仪器设备有限公司），PB-10普及型pH计（北京赛多利斯仪器系统有限公司），HH7S21-4电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂），H-1650台式高速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司），SPX-250B-Z型生化培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）。1.4培养基实生幼苗子叶组培培养基：MS+16-BA+0.5mg?L-lIBA+8g?L-l琼脂。原生质体液体培养基I/渗透压稳定剂/清洗液：MS+2,牛D1mg?L-l+6-BA0.5mg?L-l+0.7mol?L-l甘露醇。原生质体液体培养基II:MS+2,4-D1mg?L-l+6-BA0.5mg?L-l+0.4mol?L-l甘露醇。原生质体再生固体培养基：原生质体液体培养基I+8g?L-l琼脂。以上培养基pH值均为5.8。1.5试验方法1.5.1子叶及预处理果实晒干后，置-20°C冰箱保存。经过1~2个月后取出，温水浸泡，搓取洗净种子，每天换水浸泡使其吸足水分后，以种子与洁净湿沙为1:3混合置25°C恒温催...