人工脂质体染色方法的探究V01.34第34卷第2期湖北大学学报口然科学版No・21111丝！旦!!!!塑！！！鑒！！生堂堑！！！擊！|!型！！！竺！塞！！竺！！J!垒:!!!!文章编号:i000?2375201202?0184"04人工脂质体染色方法的探究苏伟，阚文静,王绍华，彭方武汉大学生命科学学院，湖北武汉430072摘要在一定的温度、渗透压、离子强度条件下，利用脂质休材料Lpphosphatidylcholine制备人工脂质体,借助结晶紫染液、美蓝染液、复红染液、钳蓝染液、苏丹黑染液，对脂质体进行染色，结果表明经结晶紫染色后的脂质体在光学显微镜下具有形态大小分明、数量多、立体结构清晰等特征•为丁优化染色方案，进一步获取最佳染色配比，实验进行了梯度染色。得到了背景清晰、脂质体立体结构明显的最佳染色方法，解决了光学显微镜下不易分辨脂质体的问题，为后续实验的开展奠定基础.关键词人工脂质体;染色;优化小图分类号Q503;R94文献标志码A0引言人工脂质体是一种人工膜体系，可以形成单层膜，也可以是连续的双层或多层复合脂质组成的人工小球囊，直径不等，约25~100nrn•科研工作者利用乙醇注入法LfJ、薄膜分散法、超声波分散法［z］、逆相蒸发法u］、冷冻干燥法等多种方法成功地制备了人工脂质体•脂质体可以和细胞膜融合，将药物或者小分子送入细胞内部。应用于转基闲或药物制备•因此.脂质体是-•种良好的生物学材料，被广泛应用于生物领域、医学领域…纠和药学领域M伽.1976年徳国的马普生物物理研究所创建了膜片钳技术阻“］，利用双屯极钳制细胞膜电位，记录离子通道的离子屯流，反映了细胞膜单一的或多个的离子通道分子活动.膜片钳技术广泛地应用到平面双分了层、脂质体等人工标木上，对细胞膜离子通道进行性质鉴定及动力学研究，以阐述离子通道与细胞膜相互作用的机制，因而对脂质休的形态、结构有较高的耍求.脂质体的制备对后续定性和定量实验有着重要作用，所以，在制备脂质体的过程中，研究者需要找到一种观察脂质体的形态特征、预测脂质体制备效果的方法.传统研究方法屮，电子显微镜成为观察脂质体的一种方法,但具有一定的局限性，只能观察平而结构，成本较高，且不能随时观察•木研究利用染色的方法对脂质体进行观察，通过不同染色方法的对比，将染色效果最佳的方法进行优化，从而能够在光学显微镜下观察到立体结构清晰、形态完整的脂质体•该方法简单、可行.冃前财脂质体染色的研究尚少见报道，本研究对脂质体的染色进行了，探究，建立了一种观察脂质体的新方法,为后续实验需要打下基础・1材料和仪器1.1材料h?phosphatidylcholineL-a一磷脂酰胆碱sigma,氯化钠国药集团化学试剂有限公司，AR，结品紫沈阳试三生化科技开发有限公司，美蓝上海易利生物科技有限公司，复红北京恒业小远化工有限公司，钳蓝，苏丹黑沈阳市试剂三厂・1.2试剂1%的结晶紫染液,0.01%的美蓝染液，复红染液，钥蓝染液，苏丹黑染液参考《微生物学实验》进行配制,蒸憾水，三氯甲烷国药集团化学试剂有限公司，AR・收稿开期：2011?11-25基金项目：回家口然科学基金3107D038、教育部博士点基金203资助作者简介：苏伟1989一，男，本科生；彭，通信作者，副教授,E-mail;fangpen92@yahoo.00札cn第2期苏伟等:人T脂质体染色方法的探BX51・1.3仪器玻璃珠，试管，摇床，烘箱，显微镜Olympus2方法mL氯仿、一粒玻璃珠,待固体2.1脂质体的制备取1肛g「m?phosphatidylcholine于试管中，加入1磷脂完全溶解后，氮气吹干，加入浓度依次为o%、0.9%、1.2%、1.5%、1.8%、3.0%的1mL氯化钠溶r/min,过夜.液，分别编号为al、a2、a3、a4、a5.a6.将样品放入42°C摇床,502.2脂质体染色将一滴脂质体样品溶液置于载玻片中央，加盖玻片，在普通光学显微镜、相差显微镜下宜接观察；分别取5耻L染液1%的结品紫染液,0.01%美蓝染液，复红染液,钳蓝染液，苏丹黑染液于样品溶液30uL中，混匀，镜检.2.3梯度染色取染色效果最佳的染液进行梯度染色,30弘L样品液中分别加入1、3、5弘L染液，混匀，镜检，寻求最优的染色配比.3结果表1不同的染色液对脂质体染色效果的对比3.1不同染液对脂质休的染色效果实验结果染色效果表明，苏丹黑染液和美蓝染液不能使脂质体着++++一结构色,...