RAW264.7正常组：RANKL诱导。牛血清白蛋白对照组：RANKL+牛血清白蛋白(100mg/L)。破骨细胞骨吸收实验：检测破骨细胞无机骨基质溶解能力。王海兴，男，1991年生河南省新乡市人，汉族，中山大学附属第一医院在读硕士，主要从事骨质疏松及关节假体松动发生机制方面的研究。通讯作者:盛璞义，主任医师，中山大学附属第一医院关节外科，广东省广州市510080:R318文献标识码:A:2095-4344(2017)12-01826-07稿件接受：2017-03-08WangHai-xing,Studyingformaster’sdegree,DepartmentofJointSurgery,theFirstAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510080,GuangdongProvince,ChinaCorrespondingauthor:ShengPu-yi,Chiefphysician,DepartmentofJointSurgery,theFirstAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510080,GuangdongProvince,China晚期糖基化终末产物组：RANKL+晚期糖基化终末产物(50-400mg/L)。晚期糖基化终末产物可通过调节V-ATPasea3与ClC-7影响破骨细胞的泌酸功能王海兴1，李子卿1，肖胤勃1，张紫机1，张阳春1，杨兴1，李朝红2，盛璞义1(1中山大学附属第一医院关节外科，广东省广州市510080；2中山大学中山医学院组织胚胎学教研室，广东省广州市510080)引用本文：王海兴，李子卿，肖胤勃，张紫机，张阳春，杨兴，李朝红，盛璞义.晚期糖基化终末产物可通过调节V-ATPasea3与ClC-7影响破骨细胞的泌酸功能[J].中国组织工程研究，2017，21(12):1826-1832.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.12.004ORCID:0000-0001-8555-4827(王海兴)文章快速阅读：晚期糖基化终末产物通过抑制破骨细胞的泌酸功能影响其骨吸收能力检测破骨细胞V-ATPasea3及ClC-7的表达水平。结论：晚期糖基化终末产物可抑制V-ATPasea3及ClC-7的表达，进而削弱破骨细胞的泌酸功能并抑制骨吸收。文题释义：晚期糖基化终末产物：晚期糖基化终末产物是在非酶促条件下，蛋白质、脂类或核酸等大分子物质的游离氨基与还原糖的醛基经过缩合、重排、裂解、氧化修饰后产生的一组稳定的终末产物。随着人体的衰老，晚期糖基化终末产物会在组织中累积，对正常的生理活动造成影响。破骨细胞泌酸：破骨细胞对骨吸收坑的酸化是骨吸收进行的重要条件。当成熟的破骨细胞黏附在骨表面后，其通过细胞褶皱缘上的质子泵V-ATPase和氯离子通道ClC-7向骨吸收坑内分泌H+和Cl-，在细胞与骨表面之间形成酸性的骨吸收微环境，这种酸性微环境对于骨矿物质的溶解及有机骨基质的降解非常重要。摘要背景：晚期糖基化终末产物对破骨细胞骨吸收功能的影响存在争议，作者的前期研究表明晚期糖基化终末产物作用于破骨细胞前体可显著抑制骨吸收功能，但关于其对破骨细胞泌酸功能的影响尚不明晰。目的：探究晚期糖基化终末产物对破骨细胞泌酸功能的影响及其机制。方法：以15μg/L的RANKL对破骨细胞前体RAW264.7进行定向诱导(正常组)，实验组中另加入50-400mg/L不等的晚期糖基化终末产物及对照用牛血清白蛋白(100mg/L)。通过骨吸收实验验证晚期糖基化终末产物对骨吸收的抑制效应，并以吖啶橙染色观察晚期糖基化终末产物对破骨细胞泌酸功能的影响；进一步检测质子泵V-ATPasea3及氯离子通道ClC-7的表达情况，分析晚期糖基化终末产物影响破骨细胞泌酸的相关机制。结果与结论：①晚期糖基化终末产物组的骨吸收面积较正常组显著减少(P<0.05)；②吖啶橙染色显示晚期糖基化终末产物组的红色荧光(620nm)强度较正常组显著减少(P<0.05)，抑制程度随着刺激浓度的增高而加重；③免疫细胞化学染色、蛋白质免疫印迹及PCR发现，晚期糖基化终末产物组的V-ATPasea3及ClC-7表达量均较正常组显著下降(P<0.05)；④综上结果表明，晚期糖基化终末产物作用于破骨细胞前体可显著抑制破骨细胞的泌酸功能，其机制可能与晚期糖基化终末产物抑制了质子泵V-ATPasea3及氯离子通道ClC-7的表达相关。关键词：组织构建；骨细胞；糖基化终末产物；破骨细胞；骨吸收功能；空泡型质子泵V-ATPase；氯离子通道ClC-7；吖啶橙染色；破骨细胞泌酸；国家自然科学基金主题词：糖基化终产物，高级；破骨细胞；组织工程基金资助：国家自然科学基金面上项目(81672149)，资助单位：中山...