慢性HBV携带者肝组织PD―1表达的临床意义[摘要]目的探讨肝脏组织中程序性死亡分子1（programmeddeath-1，PD-1）表达在慢性HBV携带者病情进展中的作用。方法选择慢性HBV携带者病例50例为研究对象，均予以血生化、病毒DNA、肝纤维化指标检测；患者肝穿刺活检后肝脏组织进行病理HE染色，观察肝脏组织炎症和纤维化的表现，并根据炎症结果将50例分为：A组：炎症0级；B组：炎症≥1级。免疫组化检测肝组织PD-1表达。结果根据炎症结果病例分为两组：A组26例（炎症G0）和B组24例（炎症≥G1）。病理分级炎症≥G2或纤维化≥S2的例数为15例。两组患者4种血清肝纤维化指标水平均无统计学差异。与A组比较，B组肝脏PD-1表达水平明显高（P<0.05）。PD-1表达与肝纤维化分级相关性分析结果呈正相关。结论慢性HBV携带者肝脏组织PD-1表达水平越高，炎症及纤维化进展的可能性越大，肝脏PD-1表达可作为慢性HBV携带者病程进展的评估指标之一。[关键词]慢性HBV携带者；肝脏；纤维化；程序性死亡分子1[]R512.62[文献标识码]B[]1673-9701（2014）34-0008-03临床上，慢性HBV携带者为处于慢性乙肝病毒感染的免疫耐受期，虽定期检查肝功能，结果往往在正常范围，CT、B超等影像学检查亦无明显异常发现，疾病的进展具有“隐蔽性”。随着病程的延长，虽然其生化指标持续在正常范围，但肝脏组织学的损伤已逐渐出现，甚至有研究报道HBVDNA高载量水平的慢性HBV携带者具有一定的肝硬化、肝癌风险[1]。因此对于HBV携带者的肝脏损伤、纤维化评估以及早期针对性药物干预具有非常重要的临床意义。但是，目前对于此类患者肝脏损伤整体评估以及预测肝炎活动发生缺乏有效手段。PD-1是一种抑制性共刺激分子，在维持外周耐受中起关键性的作用，既往研究中描述了其在慢性病毒感染、肿瘤免疫及自身免疫性疾病的发生过程中发挥重要的生物学作用[2-4]。更有研究发现其在乙肝病毒清除过程中发挥负性调控的作用，与HBV慢性感染密切相关[5]。本研究旨在对慢性HBV携带者进行肝活检，检测肝脏组织中PD-1表达，并进一步探索其在慢性HBV携带者病程进展中的作用。现报道如下。1资料与方法1.1临床资料选择2010年11月1日～2013年2月5日在温州医科大学附属第二医院感染内科行肝穿刺活检术的慢性HBV携带者，纳入研究50例，男32例，女18例，年龄20～45岁，均无临床症状，肝脏影像学无明显异常，无其他慢性疾病史。慢性HBV携带者诊断标准参照2010年12月修订的《慢性乙型肝炎防治指南》[6]。1.2试剂PD-1小鼠抗人单克隆抗体、二抗试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。1.3实验室检查所有病例均行HBV血清标志物、HBVDNA定量、肝纤维化血清指标检测。血清肝功能检查采用LX20PRO（Beckmancoulter公司）全自动生物化学检测仪；血清乙肝免疫采用北京万泰生物技术公司ELISA试剂盒，HBVDNA检测采用深圳匹基生物工程股份有限公司试剂盒。1.4肝穿刺---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---所有病例均无肝穿刺禁忌证。B超定位下快速经皮肝穿刺活检术，每例患者穿刺2条肝脏条索组织，肝穿刺标本长度不短于1.5cm，内径不小于1mm。1.5病理学检查肝穿刺获得的肝脏条索组织用10%中性甲醛固定，之后依次石蜡包埋、切片，行HE染色；由温州医科大学附属二院病理科2名专家阅片，病理诊断标准参照《慢性乙型肝炎防治指南》[6]，评定标本的炎症分级（G）和纤维化分级（S）。根据病理炎症结果将50例病例分为两组：A组：炎症G0；B组：炎症≥G1。1.6免疫组化检测肝脏组织PD-1表达石蜡切片脱蜡、水化，3%双氧水孵育，双蒸水冲洗，PBS浸泡，枸橼酸缓冲液中微波修复，PBS冲洗，血清封闭，室温孵育后倾去血清，滴加PD-1一抗工作液，37℃孵育，PBS冲洗后滴加二抗工作液，37℃孵育，PBS冲洗，滴加辣根酶标记SP工作液，37℃孵育，PBS冲洗，之后DAB显色剂显色，苏木素复染。梯度酒精脱水、透明、封片。用图像分析软件Image-ProPlus6.0重复3次读取每张片的阳性区域的吸光度值，取平均值作为蛋白的相对含量。1.7统计学分析采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析，计量资料组间比较t检验；相关性分析使用非参数检验Spearman（...