麻醉学专业优秀论文脊髓背角补体异常活化与神经病理性疼痛关系的实验研究关键词：坐骨神经慢性压迫性损伤神经病理性疼痛脊髓背角补体补体蛋白补体C3眼镜蛇毒因子摘要：一、研究背景越来越多的研究表明，胶质细胞激活是神经病理性疼痛的充分和必要条件。补体蛋白作为胶质细胞合成分泌的重要物质，在中枢系统疾病发挥不可或缺的作用。关于补体活化在神经病理性疼痛发病机制中的作用，目前鲜有研究。2005年美国著名学者Milligan等研究中发现，鞘内注射可溶性补体受体l可逆转神经病理性疼痛模型动物的痛觉过敏，从一定程度上反映了补体蛋白可能参与NPP的发生和发展。但是NPP时脊髓背角补体是否发生异常活化？补体表达有无规律？Milligan并无研究。二、目的本研究观察坐骨神经慢性压迫性损伤诱发NPP模型大鼠脊髓背角补体C3变化，采用补体抑制剂-眼镜蛇毒因子干预NPP模型大鼠脊髓补体表达，观察它对大鼠痛阈的影响，进而探讨脊髓补体异常活化在NPP形成中的作用。三、方法实验分三部分：1.大鼠CCI模型的制作及行为学评估SD大鼠36只，分为假手术组(sham组，n=12)、传统坐骨神经结扎组(传统CCI组，n=12)和改良坐骨神经结扎组(改良CCI组，n=12)，观察处理后2w内自发痛、触诱发痛及热刺激痛觉过敏等行为学变化；2.神经病理性疼痛大鼠脊髓背角补体C3mRNA及蛋白的表达SD大鼠84只，均分为7组，分别为正常对照组、假手术组1、3、7d组及坐骨神经结扎后1、3、7d组，每组12只。按照分组在规定时间测定热痛阈值和机械痛阈值后处死大鼠，采用RT-PCR技术测定IA-6脊髓中补体C3mRNA水平；免疫组化测定LA-6脊髓背角补体C3阳性细胞情况；免疫比浊法测定脊髓匀浆补体C3浓度。3.眼镜蛇毒因子对神经病理性疼痛大鼠模型的干预效应SD大鼠48只，分为假手术+生理盐水组(A组，n=12，在术前和术后每同持续尾静脉注射生理盐水)、CCI+生理盐水组(B组，n=12，在术前和术后每日持续尾静脉注射生理盐水)、CCI+CVF组(C组，n=12，在术前和术后每日持续尾静脉注射CVF50ug/kg)和CCI+生理盐水+CVF组(D组，n=12，在术后第4天尾静脉注射CVF50ug/kg，其余时间给予同等容量的生理盐水)，分别在术前和术后1、3、7、14天观察大鼠自发痛及机械刺激痛觉过敏等行为学变化，两周后处死大鼠，用免疫组化测定大鼠脊髓背角补体C3阳性细胞情况，免疫比浊法测定脊髓中补体C3浓度，透射电镜观察背角神经元内部结构，分光光度法测定脊髓中SOD和MDA。四、结果1.传统CCI组和改良CCI组术后均出现结扎侧患足足趾并拢屈曲，外翻，称防御姿势。自发性痛行为评分：假手术组大鼠姿势、步态均为O分，传统CCI组大和改良CCI组大鼠评分均在2～4分。与假手术组相比，传统CCI组和改良CCI组术后均出现热痛阈值和机械诱发痛阈值降低现象；与传统CCI组相比，改良CCI组痛过敏稳定、持久，自噬现象较传统CCI组少。2.CCI大鼠坐骨神经结扎侧后1、3、7天脊髓背角补体C3蛋白及mRNA都显著表达，并呈进行性升高趋势，而假手术组无明显变化；Pearson相关分析显示，CCI大鼠脊髓背角补体异常活化状况与大鼠痛觉过敏程度相关。3.单次尾静脉注射CVF可—过性提高模型大鼠痛觉阈值，并随着药物的代谢作用逐渐减弱；持续给予CVF可抑制大鼠痛觉过敏的发生；脊髓匀浆SOD和MDA测定结果显示：与A组，相比，B组大鼠脊髓匀浆中SOD活力降低，MDA产物含量增多；与B组相比，C组大鼠脊髓匀浆中SOD活力升高，MDA产物含量下降。透射电镜观察，B组大鼠脊髓背角神经元内线粒体肿胀，核膜损伤；与B组相比，C组大鼠脊髓背角神经元线粒体肿胀程度明显减轻。五、结论1.改良CCI模型可以产生明显的、稳定的自发性疼痛和诱发性疼痛等类似临床神经痛的症状和体征。2.外周神经损伤诱发的NPP模型脊髓背角发生补体异常活化，补体活化程度与痛觉过敏的形成规律基本一致。3.干预脊髓背角补体的活化可以明显抑制或逆转痛觉过敏，提示脊髓背角补体异常活化在NPP的发生发展中发挥重要作用。正文内容一、研究背景越来越多的研究表明，胶质细胞激活是神经病理性疼痛的充分和必要条件。补体蛋白作为胶质细胞合成分泌的重要物质，在中枢系统疾病发挥不可或缺的作用。关于补体活化在神经病理性疼痛发病机制中的作用，目...