胃癌组织中淋巴管密度的表达及临床意义白金陵(南京市江宁区第二人民医院211103)【摘要】目的探讨D2・40阳性者淋巴管密度(LVD)在胃癌组织中的表达与临床预后的关系。方法采用组织芯片和免疫组化技术检测74例胃癌和26例癌旁组织中D2-40的表达情况，并分别计数D2-40阳性的LVD,分析LVD与临床预后的关系。结果D2-40在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率分別为79.7%(59/74)和30.7%(8/26),差异有统计学意义(P=0.000)；胃癌组织中LVD计数11.02&plusmn;3.46,显著高于癌旁组织中的3.55&plusmn;2.09,差异均有统计学意义(P二0.000)；单因素分析显示LVD与肿瘤大小、浸润深度、肿瘤的分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关，与性别、年龄无关。通过随访证实，LVD与患者生存年限负相关。结论胃癌组织中D2・40阳性者LVD与胃癌预后呈负相关，LVD有望成为胃癌发展的预测指标。【关键词】胃癌D2-40淋巴管密度【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)14-0264-02胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤，它在我国居恶性肿瘤死亡率的第3位，胃癌患者的5年牛存率仅为10%到15%[1]«胃癌患者预后不良的重要原因是胃癌早期淋巴道的侵袭。随着大量淋巴内皮标志物的发现，淋巴转移越来越被人们重视。目前大量研究表明，肿瘤淋巴管浸润的发牛是淋巴结转移的前提。淋巴管与胃癌分期、淋巴结转移等因素密切相关，可作为判断胃癌患者预后的指标[2]。木研究中，我们应用特异性淋巴管内皮标记物D2-40,并计数D240阳性者的LVD,旨在探讨胃癌组织中D2-40阳性者LVD与胃癌预后的关系，为临床牛物治疗提供理论依据。1资料与方法1.1标本来源收集2008年2月至2010年05月我院肿瘤科及外科74例胃癌术后标本。其中---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---男性49例，女性25例；年龄最大82岁,最小46岁;I期14例，II期16例，III期30例，IV期14例。随访截止于2014年01月31日，51例患者具有完整的随访记录，最短随访吋间4个月，最长随访吋间者达67个月，中位随访时间36个月。总生存时间定义为从确诊至死亡的时间，另随机抽取对应癌旁正常组织标本26例作为对照组。病理结果经两名以上病理医师确认。1.2标本排除标准排除术前经过放射治疗或化学治疗的病例。排除患有淋巴肿瘤的患者。1.3芯片构建应用构建仪在新的空白蜡块中穿孔，然后从选取的组织蜡块中穿取组织，放入空白蜡块的小孔内，将所有组织标本种植于另一空白蜡块中并记录；应用石蜡切片机进行连续切片，厚度为4umo每组标本均含有2个原发灶肿瘤组织和1个癌旁组织，以距离肿瘤边缘2cm以上正常黏膜作为癌旁组织。1.4免疫组织化学SP法常规脱蜡水化，柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，PBS缓冲液冲洗，滴加D2・40一抗后4°C过夜,次日分别滴加二抗和链霉素抗生物素蛋白■过氧化酶溶液,3,3,二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染，常规脱水、封片。1.5主要试剂鼠抗人D2-40单克隆抗体(即用型)以及SP免疫组化试剂盒均购自上海亿新生物科技有限公司。1.6结果判定D2-40阳性标准定位于淋巴管内皮细胞胞浆中，显色呈棕黄色；CD34阳性标准定位于小血管内皮细胞的胞浆，呈棕黄色颗粒。首先在40倍光镜下观察整个切片，寻找高淋巴管密度区，然后在400倍光镜下记计数，每例计数3个视野,取其平均值作为该例LVD计数。计数时，将阳性染色的内皮细胞簇或内皮细胞形成的条状或隙状结构及有管腔者作为1个淋巴管计数。1.7统计学分析应用SPSS18.0软件处理数据。计数资料采用X2检验，两样本均数的比较采用---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---成组设计t检验，多样本均数比较采用单因素方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义，以P<0.01为差异有显著统计学意义。2结果2.1胃癌组织中D2-40的表达D2-40在胃癌中表达明显，阳性表达率为79.7%(59/74),染色淋巴管内皮细胞的胞膜和胞质呈棕黄色，多位于肿瘤边缘间质组织内，呈扩张状、多角形或闭塞的条索状等不规则形状。癌旁组织中D2・40的阳性表达率为30.7%(8/26),明显低于其在胃癌组织中的表达率(P=0.000)o2.2胃癌组织中LVD表达与临床病理特征的关系胃癌组织中LVD计数为11.02&plusmn;...