大鼠急性脊髓损伤后Bak基因的表达及其意义大鼠急性脊髓损伤后Rak基因的表达及其意义［摘要］目的探讨B磁基因在大鼠急性脊髓损伤(ASCT)中的表达及其意义。方法选取64只SD大鼠随机分为模型及对照两组,每组32只，模型组以改良Allen's法制作SD大鼠急性脊髓损伤动物模型，对照组只行椎板切开不损伤脊髓。分别于伤后3h、1、3、7d时(每个时间点8只)应用改良Tarlov评分法评价其神经功能；然后处死动物，取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色，观察形态学改变和Bak基因表达的特点；并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A(Motic.med6.0)软件，结果分别用累积光密度及细胞凋匸指数来表示。结果对照组大鼠下肢功能均无明显瘫痪，模型组大鼠下肢均出现不同程度功能障碍，对照组各时间点的Tarlov评分均高于实验组(P〈0.05)。对照组各时间点脊髓组织未见明显出血、水肿和细胞凋亡坏死，模型组各时间点脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死。对照组未见明显Bak基因表达，模型组各时间点B承基因表达均明显高于对照组(P〈0・05),模型组内Bak基因表达3h点出现，1d增加，3d达高峰，7d明显减少。模型组内细胞凋亡3h点少量出现，1d增加，3d达高峰，7d明显减少。结论脊髓损伤激活Bak基因表达，从而诱导神经细胞凋亡，可能为其病情进展的重要机制之一。［关键词］脊髓损伤；Bak基因；细胞凋亡；Be1-2家族［中图分类号］R737.9［文献标识码］A［文章编号］2095-0616(2013)12-26-04脊髓损伤(spinalcordinjury,SCT)包括原发性和继发性两种形态，以后者最为多见，多由急性外伤引发。随着现代机械产业和交通运输的发展，其发病率在世界范围内逐年升高，为目前全球性医学研究热点之一［1-2］。研究结果显示，脊髓损伤可累及感觉、运动、反射等多项生---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---理功能；临床表现为组织水肿、缺血、细胞坏死等，其中，神经细胞凋亡为其继发性功能退变的主要机制。Bak基因为Bcl-2同源类似物，可介导Bcl-2的凋亡抑制效应，具有促凋亡样作用。临床癌症研究结果显示[3-4],Bal-xl/Bak表达异常，可介导癌细胞的增生或凋亡过程,影响患者的病情进展和预后转归。近年研究表明，Bcl-2家族在脊髓损伤的发病过程中，发挥了重用作用，其中Bcl-2低表达为脊髓神经细胞大量凋亡的重用触发因素之一。本研究以急性脊髓损伤大鼠模型的Bak表达情况与神经细胞凋亡的关系为切入点，探讨Bak基因在大鼠急性脊髓损伤（ASCI）中的表达及其意义，报道如下。1资料与方法1.1实验材料1.1.1动物与分组健康SPF级SD大鼠64只（由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供），雌雄各半；月龄3-3.5个月，平均（3.2±0.6）个月；体重205-240g,平均（221.0±17.3）g。随机分为模型组和对照组各32只，适应性饲养3~5d；饲养环境：温度21〜25°C,湿度55%〜65%。1.1.2主要仪器Allens撞击器（釆用不锈钢自行制备）；全自动石蜡切片机（ERM4000,常州市郝思琳医用仪器有限公司）；电热鼓风干燥箱（WD841-1,吴江万达电热设备有限公司）；超低温冰箱（DW-86L205,广州傲雪制冷设备有限公司）；荧光显微镜（CYG-055D,麦克奥迪）等。1.1.3主要试剂青霉素注射液（山东鲁抗医药股份有限公司）;庆大霉素注射液（山东鲁抗医药股份有限公司）；HE染色液试剂盒（上海亿欣生物有限公司）；TUNEL试剂盒（南京凯基）;Bax—抗（abeam）；Bax二抗（abeam）；其他试剂如二甲苯、蔗糖、无水乙醇等均为国产分析纯。1.2实验方法1.2.1大鼠脊髓损伤模型的制备方法模型组以改良Allens法制备脊髓损伤大鼠模型，对照组行椎板切开，不损伤脊髓。制备方法:---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---（1）1%戊巴比妥钠（0.ImL/kg）腹腔注射麻醉，俯卧位固定于解剖板；（2）以浮肋与13胸椎连接处为基准点，在5cm2范围内脱毛，显露光滑皮肤组织；（3）酒精消毒，以消毒器械操作，在后正中线2〜3cm做纵行切口，依次切开皮肤、筋膜，可见白色腱膜；（4）借助剥离分针钝性剥离椎旁肌肉丛，可暴露棘突、椎板和横突；（5）定位并标记...