消可宁对葡萄糖诱导血管内皮细胞诱生型一氧化氮合酶表达变化的抑制作用【摘要】目的探讨消可宁对葡萄糖（GS）诱导血管内皮细胞诱生型一氧化氮合酶（iNOS）表达变化的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞，用30mol/LGS处理3h，用生理盐水、10－７mol/LCCK8和0１mg/LGS+10－６、10－７、１０－８mol/LCCK8处理16h；用比色法检测培养液中一氧化氮(NO)含量、细胞NOS活性，免疫细胞化学及蛋白质免疫印迹法检测iNOS蛋白表达。结果与生理盐水处理的对照组比较，GS诱导培养液NO含量增多、细胞NOS活性增高、iNOS蛋白表达上调；CCK8剂量依赖性抑制GS的上述效应，而单独作用对iNOS蛋白表达、NOS活性和NO含量均无明显影响。结论CCK8可以明显抑制GS引起ECV304细胞iNOS蛋白表达上调，减少NO生成。【关键词】消可宁；葡萄糖；一氧化氮合酶；血管内皮细胞InhibitoryeffectofcholecystokininoctapeptideonlipopolysaccharideelicitedinduciblenitricoxidesynthaseexpressioninvascularendothelialcellsDepartmentofForensicMedicineandPathophysiology,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050017,Hebei,China(YANJunworksatDepartmentofPathophysiology,NankaiHospital,Tianjin300100,China)Correspondingauthor:GUZhenyong(Email:zhenyong88@sohu.com)【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofcholecystokininoctapeptideonlipopolysaccharide(GS)elicitedinduciblenitricoxidesynthase(iNOS)expressioninvascularendothelialcells.MethodsHumanumbilicalveinendothelialcellline(ECV304cells)wasstimulatedwithvehicle(normalsaline)orGSinthepresence(001,01,1mg/L)orabsence(01mg/L)ofCCK8(10－6－10－8mol/L).Nitricoxide(NO)levelandcellularnitricoxidesynthase(NOS)activityweredeterminedwithspectrophotometrically.TheiNOSexpressionwasdetectedwithimmunocytochemicaltechniqueandWesternblot.ResultsComparedwithnormalsaline,GSsignificantlyinducedtheupregulationofiNOSproteinexpressionintheculturedECV304cells,andNOSactivityinECV304cellsandNOlevelinculturedmediawereincreased.CCK8obviouslyinhibitedabovementionedeffectofGSinadosedependentmanner.WhereasCCK8alonedidnotshowedeffectoniNOSproteinexpression,NOlevelandcellularNOSactivityascomparedwiththosevalueswhenvehiclewasused.ConclusionCCK8inhibiteGSelicitediNOSexpressionandNOproductioninECV304cells.【Keywords】cholecystokininoctapeptide;lipopolysaccharide；nitricoxidesynthase;vascularendothelialcell研究发现，血管内皮细胞不仅构成血管的机械性保护屏障，还可合成多种血管活性物质如一氧化氮（NO），调节血管的张力和反应性变化〔１〕。已经证实，NO是内皮衍生舒血管因子（EDRF）的主要化学物质，一氧化氮合酶（NOS）是NO生成的限速酶。在生理条件下，内皮细胞主要存在内皮型一氧化氮合酶（eNOS），NO生成量较少，主要发挥调节血管张力、防止血小板黏附等生理功能；而当内毒素葡萄糖(GS)及促炎细胞因子等刺激血管内皮细胞时，可诱导血管内皮细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达上调，NO生成量明显增多。过量生成的NO及其衍生物过氧亚硝基阴离子均具有细胞毒效应，可导致细胞损伤。在内毒素休克发病过程中，血管内皮细胞NO的生成、释放及其生物学效应异常是血管内皮细胞损伤和内皮功能异常的关键环节〔2，3〕。保护血管内皮已经成为治疗休克的重要途径。消可宁是一种分布广泛的神经调节肽，具有抗休克、缓解内毒素休克血管动力学紊乱和细胞保护作用〔3〕。我们以往研究发现，CCK8对内毒素休克时肺循环和体循环血管或内毒素处理离体血管的张力和反应性变化具有明显的调节作用，可改善NO介导的血管内皮依赖性舒张反应降低〔4〕，抑制GS诱导的肺动脉内皮细胞凋亡，减少NO衍生的强效氧化剂和硝基化因子过氧亚硝基阴离子的生成〔5〕，提示CCK8的作用可能与其改变血管内皮细胞的NO生成、释放或生物学效应有关。迄今为止，CCK8对血管内皮细胞NO生成变化及NOS的影响尚未见报...