癌一睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平表达及意义［摘要］目的观察癌-睾丸抗原SSX基因在肝癌组织和肝癌细胞株中mRNA水平的表达情况，探究该基因家族的表达与肝癌的诊断、治疗的关系，进而评价该基因家族作为肝癌免疫治疗靶点和多价肿瘤疫苗研制的可行性。方法对28例肝细胞癌和癌旁组织、3例肝硬化组织以及肝癌细胞株7404、HePG2、7721采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测癌-睾丸抗原SSX基因在mRNA水平的表达情况。结果SSX-kSSX-2、SSX-3在肝癌癌旁组织和肝硬化组织中均不表达。在收集的肝细胞癌组织中SSX-1、SSX-3基因表达阳性率较高(53.6%、57.1%),SSX-2表达阳性率相对较低(35.7%),其中SSX-l、SSX-2、SSX-3三种基因共同表达的有6例(21.4%),至少有两种SSX基因表达的有23例(82.1%)。结论癌-睾丸抗原某些SSX基因在肝细胞癌中高频率表达与肝癌的发生、发展有关，同时基因的共同表达结果又为多价瘤苗的研究提供了实验方向。［关键词］肝细胞癌；肝癌细胞株；SSX；逆转录多聚酶链反应［］R34［文献标识码］A［］1673-7210(2013)02(b)-0004-03癌-睾丸抗原(cancer-testisantigen,CTA)是一类限制性表达于正常睾丸和肿瘤的抗原，它曾被认为与癌的发生有关。近几年来，CTA被看作是癌症免疫疗法的理想靶点而倍受关注［1］oCTA的编码基因通过诱导人体的免疫细胞引起特殊的体液免疫和细胞免疫反应。已有报道指出，CTA家族中某些基因已经用于肿瘤的分子诊断和免疫治疗［2］。滑膜肉瘤X断裂点基因(synovialsarcoma,Xbreakpointgene),又称SSX基因，是多个成员的基因家族，它们均位于X染色体pll.23-pll.22位，作为CTA家族成员之一，其只在睾丸、胎盘等具有血液屏障的正常组织中表达。对SSX基因序列和功能研究发现，SSX基因表达产物的主要功能为转录抑制。SSX基因编码的蛋白有两个功能区：SSX-KRAB区(SSX-relatedkruppelassociatedboxdomain)和SSX-RD区(SSX-repressiondomain)［3］,而SSX-KRAB区的结构域所编码的蛋白又隶属于KRAB-锌指蛋白亚群但其抑制转录的功能微弱，甚至是无效的；另一功能区SSX-RD功能发挥是通过对核内染色质进行修饰而达到抑制转录作用⑷。Tureci等［5］在325份不同组织的肿瘤样品中分析SSX1-5基因家族mRNA的表达情况时发现，除SSX-3以外其余4种基因至少有一种基因在肿瘤样品中有表达。Ayyoub等［6］对6种不同组织类型的10个滑膜肉瘤细胞系进行SSX1〜5基因mRNA表达调查发现，两种以上基因同时表达的占60%,全部肿瘤细胞至少表达一种上述基因。Naka等［7］在研究骨肉瘤SSX基因表达情况时发现，17个患者标本中有16个患者的标本至少表达SSX1-5基因中的一种。综合上述，SSX基因家族在肿瘤患者中mRNA的表达情况发现，整个SSX基因家族在癌组织中处在相对较高的表达频率，而且也存在基因共同表达情况。因此，研究针对SSX基因家族不同成员均有作用的抗原表位，势必可以提高基于SSX基因家族肿瘤免疫治疗的应用价值。本研究采用RT-PCR方法，针对肝癌组织和肝癌细胞株中SSX基因家族mRNA表达和共表达情况进行深入研究，为基于SSX基因家族的肿瘤免疫治疗和多价疫苗的研究提供理论和实验依据。1材料与方法1.1材料肝癌细胞株Bel-7404购自上海细胞所，肝癌细胞株HePG2由广西医科大学微生物学专业宋德志老师惠赠，肝癌细胞株7721来自广西医科大学组织胚胎学实验室培养传代,正常细胞株（阴性对照）7702由广西医科大学实验中心蔡新老师惠赠。收集2009年2月〜2010年10月于广西医科大学第一附属医院肝胆外科和肝移植科住院患者的外科手术切取组织。组织标本包括28例肝细胞癌及癌旁组织，3例肝硬化组织。标本的临床分期依据1977年全国肝癌防治协作会议TNM分期标准。28例肝癌组织中包括11例结节型肝癌，13例巨块型肝癌，4例弥漫型肝癌，其中14例处于TNM分期的I〜III期，14例处于IV期。患者年龄22-86岁，平均50岁，其中，男24例，女4例。1-2方法1.2.1细胞培养细胞培养采用RPMI1640培养基（包括10%胎牛血清，100u/mL青霉素和100U/mL链霉素）于含5%CO2的371恒温培养箱中培养。1.2.2总RNA提取将手术后切取的肝癌组织和癌旁组织迅速放入液氮中，然后尽快转移至-80£冰箱内。用Trizol试剂（上海宝生物公...