环介导等温扩增技术的应用研究进展戴婷婷1，陆辰晨2，郑小波2（1南方现代林业协同创新中心，南京林业大学林学院，江苏南京210037；2南京农业大学植物保护学院，江苏南京210095；）摘要：环介导等温扩增技术（Loop–mediatedisothermalamplification，LAMP）采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在等温条件（60℃~65℃）下60min左右进行核酸扩增，其扩增效率可达到109~1010个数量级，具有特异性强、灵敏度高、等温、操作简单和检测结果快速等优点，已广泛应用于病毒、细菌、寄生虫、菌物等病原物的检测中。本文对LAMP技术原理及其在病原物检测中的应用做了简要综述。关键词：环介导等温扩增技术；应用；检测；病原物：文献标志码：：ApplicationResearchProgressOfLoop-MediatedIsothermalAmplificationDAITing-ting1;LUChen-chen2;ZHENGXiao-bo2(1SouthernChinaCollaborativeInnovationCenterofSustainableForestry,CollegeofForestry,Nan激ngForestryUniversity,Nan激ng,激angsu210037,China；2CollegeofPlantProtection,Nan激ngAgriculturalUniversity,Nan激ng210095,China)Abstract：AnewmethodofgeneamplificationcalledLoop-mediatedisothermalamplification(LAMP)hasbeendevelopedinrecentyears.LAMPassaypossesscharacteristicofsimpleness,fleetnessandhighspecificity.Thewholeprocedureisverysimpleandrapidwhichcanbecompletedinlessthan80minunderisothermalconditionsemployingasetofsixspeciallydesignedprimersofatargetgene,byincubatingallthereagentsinasingletube.LAMPdoesnotrequireathermalcyclerandcanbeperformedsimplywithaheatingblockorwaterbath.Consideringtheadvantagsofrapidamplification,simpleoperationandeasydetection,LAMPhaspotentialapplicationsfordiagnosisaswellassurveillanceofinfectiousdiseasesindevelopingcountrieswithoutrequiringsophisticatedequipmentorskilledpersonnel.LAMPhasbeenwidelyappliedtothedetectionofsuchpathogensasvirus，bacteria,parasite,fungietc.ThissummarizedtheprincipleofLAMP，andtheapplicationindetectionofpathogenicmicroorganisms.KEYWORDS：Loop-mediatedisothermalamplification;application;detection;pathogenicmicroorganisms核酸扩增技术是分子生物学领域的一项重要的研究手段，核酸扩增技术主要包括常规PCR为基础的变温扩增技术以及等温扩增技术两大类。目前，变温扩增技术主要包括普通PCR、巢式PCR、多重PCR、实时荧光定量PCR等，这些技术在病原微生物的检测中发挥着重要的作用。由于核酸的变温扩增技术需要精密变温设备和高级复杂的分析仪器，或者对操作人员的熟练度和专业水平要求比较高，且反应时间长，不利于在基层推广；而病原菌的防控关键在于对病原微生物的快速、准确、及早的检测并确诊。因此，建立一种快速、准确的新型的等温扩增技术对于植物病原物的检测显得尤为重要。等温扩增成为核酸扩增技术的一个研究热点，环介导等温扩增技术就是其中的一种。环介导等温扩增技术是日本学者Notomi[1]等建立了一种新的核酸等温扩增技术。自LAMP检测技术建立14年以来，该技术已经广泛应用于对病毒、细菌、寄生虫、菌物等病原菌的检测研究。随着该技术体系的完善与发展，其在分子检测领域的应用也必将越来越广泛与深入。本文就该技术的原理、方法及研究进展综述如下。1环介导等温扩增技术简介1.1LAMP技术特点及原理环介导等温扩增技术是Notomi[1]等报道的一种等温核酸扩增技术。该法依赖于识别保守序列DNA的6个特异性片段的4条引物（2条外引物和2条内引物）和一种链置换DNA聚合酶（BstDNApolymerase）。反应体系一般包括4条引物、BstDNA聚合酶缓冲液、具有链置换特性的BstDNA聚合酶、dNTP、模板DNA、甜菜碱、Mg2SO4等。LAMP检测体系中基因的扩增和产物的检测可一步完成，扩增效率高，可在30～60min扩增109～1010倍，特异性较高，同时反应过程中，从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生副产物焦磷酸镁--乳白色沉淀。LAMP技术的主要原理...