六棱菊的薄层鉴别和橙皮苷含量测定研究魏江存陈勇谢臻秦祖杰黄冬美马家宝摘要：以橙皮苷为指标性成分，建立六棱菊（Laggeraalata）薄层鉴别和含量测定方法，比较广西不同产地的六棱菊中橙皮苷含量。薄层色谱中可以检出橙皮苷，斑点清晰，专属性好。橙皮苷进样量在0.30～2.25μg范围（R2=0.9996）呈良好的线性关系。六棱菊低、中、高加样组橙皮苷的平均回收率分别为99.60%（RSD=2.78%）、99.97%（RSD=2.08%）和99.01%（RSD=1.36%）。广西境内10批不同产地的六棱菊中橙皮苷的含量差别较大，这可能与气候、温度、土壤、水分、光照等生长条件有关。该方法能有效鉴别六棱菊，准确测定橙皮苷含量，为开发利用六棱菊资源提供了科学依据。关键词：六棱菊（Laggeraalata）;橙皮苷;薄层色谱法;高效液相色谱：S567.23+9：A：0439-8114（2018）23-0139-04DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.23.033开放科学（资源服务）标识码（OSID）：六棱菊（Laggeraalata）系菊科六棱菊属植物，全草入药，性苦、辛，微温，有祛风、除湿、解毒之功效，主要分布于中国东部、东南部至西南部，北至安徽和湖北[1，2]，因其新鲜的枝叶揉搓后散发特殊的臭味，在民间作为抗菌消炎、清热解毒的良药，云南民间称之为“臭灵丹”[3]，以臭灵丹为主的许多复方制剂在临床上应用也取得较好的疗效[4-8]。六棱菊常用于跌打损伤、烧烫伤、毒蛇咬伤、感冒咳嗽、风湿关节炎、皮肤湿疹和腹痛泻痢等多种疾病[3]。目前，临床多用于呼吸道疾病[9]、感冒[10]和病毒感染[11]等疾病的治疗，但其有效成分尚不明确。近年来，国内外学者对六棱菊进行了相关研究，试验表明[3，12-17]，六棱菊主要含黄酮类、倍半萜类和酚酸类等化合物。目前，国内外未见对其进行薄层鉴别和含量测定的相关研究，为保证其药材质量及临床疗效，本试验建立了六棱菊橙皮苷的薄层鉴别和含量测定方法，为建立六棱菊活性成分科学、合理、可控的质量标准提供科学依据。橙皮苷是极有药用价值的天然资源，研究表明[18，19]，橙皮苷在抗氧化、抗炎、抗动脉粥样硬化、抗心肌缺血、血脂调控、抗血栓、降血压及抗心律失常等心血管保护作用方面均有较好的效果，中国拥有丰富的橙皮苷资源，测定六棱菊中橙皮苷的含量，并比较广西不同产地六棱菊中橙皮苷的含量差异，以完善六棱菊的质量控制。本研究将同时对广西境内10批不同产地的六棱菊进行橙皮苷的薄层鉴别和对其含量测定，为六棱菊药材的质量评价提供参考，也为研究六棱菊药材的质量控制新方法奠定基础。1材料与方法1.1仪器2695型高效液相色谱仪（包括2489UV，四元泵、真空脱气泵、自动进样器、柱温箱和Empower3液相工作站），美国Waters公司;Simplicity超纯水系统，密理博中国有限公司;Practum224-1CN分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司;SHB-III循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司;DHG-9203A型电热恒温鼓风干燥箱，上海齐欣科学仪器有限公司;TGL-16G高速台式离心机，上海安亭科学仪器厂;HWS-26电热恒温水浴锅，上海齐欣科学仪器有限公司;尼龙66（Nylon）-22μm微孔濾膜，天津津腾。1.2试药橙皮苷对照品（批号：170213，纯度>98.0%，上海融禾医药科技有限公司）;甲醇为色谱纯（Fisher，4L）;乙醇、磷酸、醋酸和其他试剂为分析纯，试验用水为去离子水。六棱菊药材采摘于广西贺州市昭平县，经广西中医药大学中药鉴定教研室老师鉴定为菊科六棱菊属植物六棱菊的全草。薄层硅胶G板，青岛海洋化工厂。试验所有样品（表1）执行标准均为2015年版《中国药典》一部。1.3方法1.3.1六棱菊样品制备采集六棱菊全草，自然晒干后，将其粉碎过三号筛，备用。1.3.2薄层鉴别称取六棱菊药材粉末5g，加75%乙醇100mL，回流1h，滤过，滤液挥干加甲醇3mL使其溶解，作为六棱菊供试品溶液。取橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解，配制成0.32mg/mL的对照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水体积比为100∶18∶12为展开剂，展开5cm，取出，晾干，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上层溶液作为展开剂，展开12cm，取出晾干，喷1%的三氯化铝试液，置325nm紫外光灯下检视。1.3.3阴性对照...