第30卷第4期渔业科学进展2009年8月PROGRESSINFISHERYSCIENCESVol.30,No.4Aug.,2009紫外诱变原生质体选育溶菌酶高产菌株的研究冯学珍1,2,3郑媛1王跃军1孙谧13于建生2程江峰2(1中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛266071)(2青岛科技大学化工学院)(3)摘要以12),、再生及:菌株S212286培养18h,溶菌酶浓度为1.,在下,30min,原生质体形成率为9716%,再生率为2316%。同时实:30W紫外灯下80cm照射120s。对大量再生突变株进行筛选,最终获得了1株遗传性能稳定的菌株R2J2101,其产酶活力达到1808U/mg,比原始菌株(1290U/mg)提高了40%。关键词海洋溶菌酶原生质体的制备和再生芽孢杆菌诱变中图分类号Q557文献识别码A文章编号100027075(2009)0420090206BreedingofahighlysozymeproducingBacillusstrainbymutagenesisofprotoplastsFENGXue2zhen1,2ZHENGYuan1WANGYue2jun1SUNMi13YUJian2sheng2CHENGJiang2feng2(1YellowSeaFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisherySciences,Qingdao266071)(2CollegeofChemicalEngineeringQingdaoUniversityofScienceandTechnology,266042)(3PharmicDepartmentLiuzhouMedicalCollege,545006)ABSTRACTThepreparation,regenerationandUV2mutagenesisofprotoplastsofstrainS212286,whichhadhighlysozyme2producingactivity,werestudied.Theresultsshowedthattheoptimalcondi2tionsofthepreparationandregenerationofprotoplastwereasfollows:incubationtimeofthestrainS212286was18h,concentrationsoflysozymewas1.0mg/ml,andtimeofenzymolysiswas30minat35.Theratesofformationandregenerationofprotoplastundertheoptimalconditionswere9716%and2316℃%,respectively.TheoptimalconditionformutagenesisofprotoplastswasachievedwhentheprotoplastsofstrainS212286wereirradiatedbya30wUVlampatan80cmdistancefor120s.Afterbeingselectedfromalargeamountoftheregenerativemutants,ageneticallystablemutantstrainR2J2101,ofwhichenzymeactivitywas40%higherthanthatoftheoriginalstrainS212286,wasobtainedunderspecificmutationconditions.国家自然科学基金项目(30571429)“、国家十一五863”计划项目(2006AA10Z349)、海洋生物酶制剂规模化生产的关键技术研究(2007AA091602)和青岛市科技计划项目(05222JC281)共同资助3通讯作者。E2mail:sunmi@ysfri.ac.cn,Tel:(0532)85819525收稿日期:2008202228;接受日期:2008210212作者简介:冯学珍(19812),女,硕士,主要从事海洋微生物研究。E2mail:fengxuezhenbest@163.com,Tel:13557727819第4期冯学珍等:紫外诱变原生质体选育溶菌酶高产菌株的研究91KEYWORDSMarinelysozymeProtoplastpreparationandregenerationBacillussp.Mutagenesis溶菌酶(1ysozyme)是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶,具有分解细菌细胞壁中的肽聚糖的特殊作用,具有防腐和杀菌作用,可以广泛应用到医疗行业和科学研究领域(李敏2006)。溶菌酶广泛存在于各种生命体中,小到细菌噬菌体、细菌和真菌,大到植物、动物,均有该种物质的分布。其中鸡蛋清里含量较高,为315%。目前的商品溶菌酶多由蛋清中提取,其应用范围窄,仅对革兰氏阳性菌有作用种来源的溶菌酶进行了广泛的研究(Yuetal.2002et1999;2005),但关于海洋微生物溶菌酶的研究报道较少。海洋独特的环境,包括高盐(1株产海洋溶菌酶活性较高的菌株S212286,获得了1株产海洋溶菌酶活性比原始菌株提高40%R2J2101,为海洋溶菌酶的工业生产积累了资料。,经物理、化学处理后极易发生突变,利用原生质体作为出发材料进行诱变育种,是一种行之有效的育种技术(施巧琴等2003),其已在抗生素、酶制剂、有机酸及维生素等高产菌株的选育中得到日益广泛的应用。据文献报道(王跃军等2000)和作者的研究结果证明,对原生质体直接进行诱变处理,方法简便,效果好,能在较短的时间内提高菌种的生产能力,是选育菌种行之有效的方法。目前尚无采用原生质体选育溶菌酶高产菌株的报道。1材料与方法1.1材料1.1.1菌种芽孢杆菌(S212286)由中国水产科学研究院黄海水产研究所酶工程实验室分离保存。1.1.2培养基及试剂(1)液体培养基:蛋白胨1%,牛...