关于同时检测五种不同玛咖酰胺含量方法的探讨杨军王艳菊白永文张江荣摘要：玛咖中含有多种大量的玛咖酰胺，不同玛咖酰胺具有不同的作用，将其有效分离并应用于不同领域是发挥玛咖作用的主要途径。工业生产研究过程中曾尝试多种不同的方法，但是不同的分离方法均具有不同的优劣势，应用效果欠佳。本文主要就高效液相色谱法分离5种玛咖酰胺的基本情况进行了分析。关键词：玛咖酰胺；高效液相色谱法；含量检测：S567.2：ADOI：10.11974/nyyjs.20180432013玛咖主要产于云南迪庆、丽江等高原地区，是一种非常独特的高原农作物，具有增強体力、内分泌调节、抗氧化、抗衰老的功能，是近些年来发现并广泛应用的营养保健产品。玛咖中含有大量有价值成分，包括蛋白质、维生素、氨基酸、玛咖烯及玛咖酰胺等，其中玛咖酰胺是最为主要的功能成分，其含量的高低是决定玛咖价值的关键因素，如何将玛咖酰胺从玛咖中分离出来、选择何种安全且高效的分离方法是当前生产研究面临的重大难题。1高效液相色谱法分离玛咖酰胺实验过程1.1实验仪器与试剂仪器主要有岛津LC-20A高效液相色谱仪-配置紫外检测器、RE2000A旋转蒸发器、FRQ-1004DHT型超声清洗器、TDL-40C型低速台式大容量离心机等。试剂主要有间甲氧基-苄基-亚麻酰胺、苄基-亚麻酰胺、间甲氧基-苄基-亚油酰胺、苄基-亚油酰胺、苄基-十六烷酰胺5种玛咖酰胺对照品（纯度98%以上），乙腈（色谱纯），甲酸（色谱纯，美国天地有限公司），石油醚（分析纯，沸程60～90℃）。1.2液相色谱条件WatersXTerraC18（规格为250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，保持柱温30℃，乙腈：0.2%甲酸水90：10，等度洗脱，流动相流速1.0mL/min，紫外检测波长210nm，单次进样量10μL。1.3液相质谱联用条件选择电喷雾离子源ESI，采用正负离子进行扫描，将毛细管电压维持在4500V，选择氮气为干燥气体流量为15L/min，去溶剂温度为250℃，维持0.7MPa的喷雾器压力，进行多反应监测。1.4对照品溶液的制备利用分析天平称取适量的5种玛咖酰胺对照品将其置于250mL的容量瓶中，选择配比好的乙腈溶液溶解后定容，然后从每份制备好的对照品分别取1.0mL、0.8mL、0.6mL、0.4mL、0.2mL及0.1mL的溶液，置于10mL容量瓶中，选用乙腈溶液进行定容，摇匀后共得到30种不同浓度、不同种类的玛咖酰胺对照品溶液。1.5样品溶液的准备选择市面上常见的玛咖干制品，粉碎后过50目筛，备用。利用电子天平精密称取粉末1.5g，置于50mL的圆底烧瓶中，加入50.0mL石油醚（保证玛咖粉末能够完全浸没于石油醚中），将圆底烧瓶置于合适大小的电热套中，安装回流管回流提取约6h，将提取液和玛咖渣一同倒入50mL离心管中，5000rpm离心10min。将上清液进行旋蒸，使石油醚与玛咖酰胺进行分离，选用乙腈溶液将提取物溶解定容至5mL，并利用0.22μm一次性过滤器进行过滤，得到5种玛咖酰胺的样品提取物。2条件优化和方法评价2.1色谱条件优化对比不同流动相下玛咖酰胺的分离效果，当选择乙腈-水作为洗脱相时，玛咖酰胺分离效果的最佳，而在洗脱液中添加0.2%的甲酸溶液会得到较为对称玛咖酰胺质谱峰型，因此应当选择乙腈-水（0.2%甲酸溶液）作为首选洗脱溶液。2.2紫外检测波长的选择针对不同波长下的玛咖酰胺光谱情况进行选择，当波长在200nm时玛咖酰胺的响应强度较高，但是基线漂移现象较为严重，因此210nm紫外光线下检测光谱效果最佳。2.3柱温及流速条件经过多次试验发现，当柱温在30℃，洗脱液流速维持1.0mL/min时，5种种类的玛咖酰胺才能完全实现基线分离，在光谱上完全展示出来，而且能够有效缩短玛咖酰胺分离的时间，避免长时间的分离过程中玛咖酰胺溶解于洗脱液中，影响其含量及纯度。2.4方法学考察当所有检测分离条件完成优化后，选择混合对照品溶液，按照最佳的色谱条件进行测定，分析对照品溶度与峰面积之间的线性关系，并将对照品溶液按照不同的信噪比进行稀释，确定其检出限和定量限。2.5精密度实验将不同种类的玛咖酰胺对照品溶液选择高、中、低3种浓度，在同样的色谱条件下，重复进样6次，将不同时间段进样得到的实验结果进行比较，比较峰面积的大小，若是5种玛咖酰胺不同浓度点RSD下于1.0%，则说明玛咖酰胺提取物纯度...