食品安全国家标准食品中氨基酸的测定1范围本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定食品中氨基酸的方法。本标准适用于食品中的天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸共十六种氨基酸的测定。2原理食品中的蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的二级水。3.1试剂3.1.1盐酸（HCl）：浓度≥36%，优级纯。3.1.2苯酚（C6H5OH）。3.1.3高纯氮气:纯度99.99%。3.1.4柠檬酸钠（Na3C6H5O7·2H2O）。3.1.5氢氧化钠（NaOH）3.1.6不同pH和离子强度的洗脱用缓冲溶液：向仪器厂商购买或参照仪器说明书配制。3.1.7茚三酮溶液：向仪器厂商购买或参照仪器说明书配制。3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液（6mol/L）：取500mL盐酸（3.1.1）加水稀释至500mL，混匀。3.2.2冷冻剂：市售食盐与冰块按质量1+3混合。3.2.3氢氧化钠溶液（500g/L）：称取50g氢氧化钠（3.1.3），溶于50mL水中，冷却至室温后，用水稀释至100mL，混匀。3.2.4pH2.2柠檬酸钠缓冲溶液[c(Na+)=0.2mol/L]：称取19.6g柠檬酸钠（3.1.6）加入500mL水溶解，加入16.5mL浓盐酸，用水稀释至1000mL，混匀，用6mol/L盐酸溶液（3.2.1）或500g/L氢氧化钠溶液（3.2.3）调节pH至2.2。3.3标准品3.3.1氨基酸标准品：固体，纯度≥98%；3.3.2混合氨基酸标准溶液（1μmol/mL）：经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液。3.4标准溶液配制3.4.1混合氨基酸标准储备液（1μmol/mL）：可直接购买氨基酸混合标准溶液（3.3.2），或分别准确称取各氨基酸标准品（3.3.1），精确至0.00001g（各氨基酸标准品称量质量及摩尔质量见表1），于同一50mL烧杯中，用8.3mL6mol/L盐酸溶液（3.2.1）溶解，精确转移至250mL容量瓶中，用水稀释定容至刻度，混匀。表116种氨基酸标准品的名称配制标准储备液时的称量质量单位为毫克氨基酸标准品名称称量质量氨基酸标准品名称称量质量L-天门冬氨酸33.28蛋氨酸37.31L-苏氨酸29.77异亮氨酸32.80L-丝氨酸26.27亮氨酸32.80L-谷氨酸36.79酪氨酸45.30L-脯氨酸28.77苯丙氨酸41.30L-甘氨酸18.77组氨酸盐酸盐52.43L-丙氨酸22.27赖氨酸盐酸盐45.68L-缬氨酸29.28精氨酸盐酸盐52.68根据式（1）精确计算混合氨基酸标准储备液中各氨基酸的浓度，结果保留4位有效数字。…………………………………(1)式中：Cj——混合氨基酸标准储备液中氨基酸j的浓度，单位为微摩尔每毫升（μmol/mL）；mj——称取氨基酸j标准品的质量，单位为毫克（mg）；Mj——氨基酸j标准品的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol），各氨基酸标准品的名称及摩尔质量见表2；表216种氨基酸标准品的名称和摩尔质量单位为克每摩尔氨基酸名称摩尔质量氨基酸名称摩尔质量天门冬氨酸133.1蛋氨酸149.2苏氨酸119.1异亮氨酸131.2丝氨酸105.1亮氨酸131.2谷氨酸147.1酪氨酸181.2脯氨酸115.1苯丙氨酸165.2甘氨酸75.07组氨酸盐酸盐209.7丙氨酸89.06赖氨酸盐酸盐182.7缬氨酸117.2精氨酸盐酸盐210.73.4.2混合氨基酸标准工作液（100nmol/mL）：准确吸取混合氨基酸标准储备液（3.4.1或3.3.2）1.0mL于10mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀。4仪器和设备4.1匀浆机或实验室用组织粉碎机或研磨机。4.2分析天平：感量分别为0.0001g和0.00001g。4.3水解管：耐压螺盖玻璃管（带盖）或安瓿瓶，体积为20mL~30mL。4.4真空泵，排气量≥40L/min。4.5酒精喷灯。4.6电热鼓风恒温箱或水解炉。4.7试管浓缩仪或平行蒸发仪（附带配套15mL~25mL试管）。4.8氨基酸自动分析仪：茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪。5分析步骤5.1试样制备液体试样用匀浆机打成匀浆于-18℃以下冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。固体或半固体试样使用组织粉碎机或研磨机粉碎，固体样品粉碎至50目以下，不易磨碎的部分不可弃去。5.2试样称量准确称取一定量均匀性好的试样（如奶粉等），精确到0.0001g，（使试样中蛋白质含量在10mg~20mg范围内）；均匀性差的试样（如鲜肉等），为减少误差...