一株海洋琼胶酶产生菌的分离、筛选和初步鉴定摘要：目的从海水中分离活性较高的琼胶酶产生菌，以制备琼胶酶用于琼胶寡糖的生产,琼胶寡糖具有多种生物活性，在食殆、化妆、医药等行业有广阔的应用前景。方法以琼胶为唯-•碳源，用稀释涂布平板法进行分离，平板透明圈法进行初筛，摇瓶培养法进行复筛，改进的DNS比色法进行酶活力的测定。结果从海水中分离筛选到18株琼胶降解菌株，经复筛得到一株产酶活力较高的海洋细菌HS0326・601,并对该菌株进行了初步鉴定，结果表明其为革兰氏阴性细菌，菌体呈短杆状。结论鉴于该菌株生长速度快，通过对其进--步的诱变和发酵条件优化，有望成为高产琼胶酶产生菌，从而为琼胶酶、琼胶寡糖的深入研究和开发应用奠定基础。关键词：琼胶降解菌；琼胶酶；分离；筛选中国分类号：文献标识码：A：0000・0000(2008)00・0000・00Isolation,ScreeningandIdentificationofAgarase-ProducingBacteriafromtheSeawaterLIUMei-ying,MEI激an-feng,YINGGuo-qing*,WANGHong(Collegeofpharmaceuticalscience,Zhe激angUniversityofTechnology,Hangzhou310014,China)ABSTRACT:OBJECTIVETodegradeagarintoagaro-oIigosaccharidebytheagarasewithahigheractivity,thestrainswereseparatedfromseawater・Theagaro-oligosaccharidehaveshownwideapplicationvaluesinfoodindustry,cosmeticindustry,pharmaceuticalindustryandothersectors・METHODSTheagarase-producingbaceriawereisolatedbythespreadplatemethod,first-screeningbyclearhalosonagarplatecontainingagarasthesole-carbonsource,second-screeningofshakingculture・TheenzymaticactivitiesweredetemiinedbyimprovedDNScolorimetrymethod・RESULTS18agar-degradingstrainswereisolatedfromtheseawater,andamorepowerfulagarase-producingmarinebacteriumwasobtained・ThestrainwasdesignatedasstrainHS0326-601andidentifiedpreliminarilyasGramnegative,rod-shaped.CONCLUSIONWithregardtoitshighgrowthspeed,iffurthertreatedwithmutagens,thestrainmightbeonewithahighenzymicactivityafterfemientationoptimization,anditcouldbeusedtothefurtherstudyandappliedtothepreparationofagaraseforagaro-oligosaccharideproductioninindustry.KEYWORDS:agarase-producingbacteria;agarase;isolation;screening琼胶(agar)是一种从海洋红藻中提取得到的多糖，英在食品、医药卫生等行业已有悠久的应用历史，但由于琼胶黏度高，水溶性低，不易被吸收，因此在应用方面受到很大的限制。而琼胶寡糖(agaro-oligosaccharidc),即琼胶多糖经水解后聚合度为2〜10的低聚糖，又称琼胶低聚糖，主要由琼二糖的重复单位连接而成，水溶性好，有利于人体吸收，大大提高了其应用价值，琼胶寡糖具有较强的抗癌⑴刀、抗氧化卩宀、抗炎2习及抗病毒［川］等活性，是一种极具开发潜力的低聚糖。琼胶酶能降解琼胶生成琼胶寡糖，与琼胶的化学降解相比，琼胶酶降解琼胶则具有特异•性强的优点，可选择性地卿解切断特定化学键，从而制得特定聚合度的寡聚糖，并且具有反应条件温和，降解过程易于控制，无副反应，环境污染少等优点，在制备琼胶寡糖中具有明显的优势。除了制备琼胶寡糖之外，琼胶酶还可用作工具酶、用于回收DNA或RNA、海藻多糖结构的研究等⑺铁我国对于海藻多糖降解酶的研究尚处于起步状态，进行的研究人多局限于产酶菌株的筛选、卿的制备、纯化与性质分析、及酶的应用等方面，还未见关于其投入规模化发酵牛产的报道，关键就在于缺乏酶活力高的菌株〔9〕。因此筛选高产琼胶酶产生菌具有重要的理论意义和应用价值。H前，琼胶酶产生菌可以从海水、海洋动物肠道、底泥等海洋环境以及湖泊、河流、排污口等陆地环境中获得［1°~叫甚至从菠菜根系中也可筛选到琼胶降解菌株［⑴,但人多数琼胶酶产生菌从海洋环境中分离得到山。本实验先后从舟山、台州等地采集海水样，从中分离筛选到一株活力较高的菌株，并对其进行了初步鉴定。旨在为琼胶酶、琼胶寡糖的深入研究和开发应用提供基础。1材料与方法1.1材料1.1.1海水样品取自浙江舟山册子岛...