对乙酰氨基酚中毒快速检验——血清中对乙酰氨基酚薄层色谱扫描检测摘要目的:建立了血清中对乙酰氨基酚的提取和薄层色谱扫描定性和定量检测方法。方法:应用以上二种方法快速检测,并对2例可疑对乙酰氨基酚中毒者进行了检验。结果:血清中线性检测范围为2～64μg.ml-1,最小检出浓度为1μg.ml-1。一例口服10片泰克0.75～1h血清对乙酰氨基酚含量为25.5mg.L-1。一例白加黑过敏者血清中对乙酰氨基酚含量为8mg.L-1。结论:本法快速、简便、定性定量准确,可用于对乙酰氨基酚中毒的快速诊断和体内药物浓度监测。关键词对乙酰氨基酚,中毒,薄层色谱扫描,血清对乙酰氨基酚(Paracetamol,扑热息痛,醋氨酚,Acetaminophen,AAP)是临床常用的解热镇痛药。常用于感冒发热、关节痛、神经痛和偏头痛的治疗,有时会发生服药过量中毒或过敏［1］。需快速定性定量检测血中AAP。血中AAP的检测以分光光度法、UV法、GC法和HPLC法报道较多［2～5］,但定性效果较差。本文从临床AAP中毒快速诊断需要出发,建立血清中对乙酰氨基酚的提取和薄层扫描定性定量检测方法,并应用AAP服药过量和白加黑过敏的诊断。1材料和方法1.1试剂和药品对乙酰氨基酚对照品购自中国药品生物制品检定所,试剂均为分析纯。标准溶液:0.67,1mg.ml-1对乙酰氨基酚对照品乙醇溶液,4℃冰箱保存。1.2主要仪器及检测条件CS-930薄层扫描仪。光谱扫描:Difference扫描方式;色谱扫描:单波长锯齿形扫描,λ1为245nm,λ2为310nm,Sx=3,记录峰面积。1.3薄层层析条件薄层板:HSGF25410×10cm×0.25mm;展开剂为正庚烷∶三氯甲烷∶无水乙醇∶乙酸乙醋∶乙酸(5∶2∶2∶1.5∶0.5),上行展开5～7cm。1.4薄层扫描响应曲线和扫描精密度对乙酰氨基酚0.67mg.ml-1标准溶液点板,展开,扫描。建立的AAP薄层扫描响应曲线回归方程为Y=-668+12420X,式中Y为斑点扫描面积积分值,X为斑点内AAP含量(μg/斑点)。线性响应范围为0.134～16.08μg/斑点,r=0.9995(P<0.05)。AAP(2.68μg/斑点,5.36μg/斑点和13.4μg/斑点,n=5)的板内、板间、日内扫描精密度为2.6%～3.8%,3.7%～4.8%和4.4%～5.3%。1.5标本采集中毒患者取血3ml立即送检,也可取第一遍洗胃液一同送检。1.6提取与检测血清0.5ml,加pH=6.8的磷酸盐缓冲液0.5ml,用8ml乙醚分二次萃取。同时取空白血清两份,分别加入AAP10μg和40μg(1mg.ml-1标准溶液),与检材平行萃取。萃取液40℃水浴氮气吹干,40μl乙醇定容,10μl点样,按前述方法展开。紫外灯下确定斑点位置,光谱扫描结合Rf值定性,色谱扫描外标两点法或工作曲线法定量。1.7工作曲线和提取回收率空白血清10份,分别加入1mg.ml-1AAP标准溶液0.5,1,2,4,8,12,18,24,32,40μl,按前述方法提取、展开和扫描,建立的血清AAP的标准曲线方程为:Y=-1.0108+1.2808×10-3X(r=0.9982)。式中Y为检材内AAP含量(μg.ml-1),X为斑点扫描面积积分值。线性检测范围为2～64μg.ml-1,最小检出浓度为1μg.ml-1。工作曲线法定量,血清中AAP(5μg/0.5ml,10μg/0.5ml和20μg/0.5ml)的相对回收率为99.47±4.34%,97.5±3.63%和104.1±4.7%(±s,n=5)。外标两点法测定斑点内AAP绝对含量,血清中AAP(5μg/0.5ml,10μg/0.5ml和20μg/0.5ml)的绝对回收率为86.2±2.8%,83.7±3.6%和78.9±3.9%(±s,n=5)。2结果与讨论2.1提取和薄层色谱AAP4μg点板,展开,扫描。薄层层析见1,AAPRf值为0.40。AAP光谱扫描见2,最大吸收波长为255nm。色谱扫描见3,峰形对称,AAP与乙酰水杨酸(Rf=0.65)、双氯芬酸(Rf=0.88)和血液提取物中杂质分离完全。1AAP薄层层析1.AAP标准品2.中毒患者血中AAP3.空白血清中添加AAPA.AAPB.乙酰水杨酸C.双氯芬酸2AAP光谱扫描1——AAP标准品2---中毒患者血中AAP3—*—空白血清添加AAP3AAP色谱扫描1.AAP标准品2.中毒患者血提取物A.AAPB.乙酰水杨酸C.双氯芬酸本文建立的AAP的提取和薄层扫描检测方法与文献［2～5］相比,具有操作简便快速、定性准确的特点。AAP色谱行为,斑点扫描精密度和线性扫描范围,检材内AAP提取检测线性范围、提取回收率、最小检出浓度均达到生物检材内药物检测和体内AAP浓度监测的要求［6］,可用于AAP的体内浓度监测和AAP中毒的快速诊断。2.2病例检测2例服药过量患者体内AAP检测结果见表1。其斑点Rf值和光谱...