食品安全国家标准食品中β-胡萝卜素的测定1范围本标准规定了食品中β-胡萝卜素的测定方法。本标准适用于食品中β-胡萝卜素的测定。2原理试样经皂化后，使β-胡萝卜素完全变为游离态。用石油醚萃取后，反相色谱法分离，外标法定量。3试剂和材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1α-淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg。3.1.2氢氧化钾（KOH）。3.1.3无水硫酸钠（Na2SO4）。3.1.4抗坏血酸(C6H8O6)。3.1.5石油醚：沸程30℃～60℃。3.1.6甲醇(CH4O)：色谱纯。3.1.7乙腈(C2H3N)：色谱纯。3.1.8三氯甲烷(CHCl3)：色谱纯。3.1.9正己烷(C6H14)：色谱纯。3.1.10甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]：色谱纯。3.1.11乙醇：体积分数为95%。3.2试剂配制3.2.1氢氧化钾溶液：称固体氢氧化钾250g，加入200mL水溶解。临用前配制。3.3标准品3.3.1β-胡萝卜素标准品，CAS：7235-40-7。3.3.2α-胡萝卜素标准品，CAS：7488-99-5。3.4标准溶液的配制3.4.1β-胡萝卜素标准储备液（500g/mL）：准确称取β-胡萝卜素标准品50mg（精确到0.1mg），用正己烷定容至100mL棕色容量瓶中。注：β-胡萝卜素标准储备液需要-10℃以下避光储存，使用期限不超过3个月。标准储备液用前需校正，具体操作见附录A。3.4.2β-胡萝卜素标准中间液（100g/mL）：从β-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0mL溶液于50mL棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度。3.4.3β-胡萝卜素标准工作液：从β-胡萝卜素标准中间液中分别准确移取0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL溶液至5个100mL棕色容量瓶。，用正己烷定容至刻度，得到浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL的系列标准工作液。3.4.4α-胡萝卜素标准储备液（500g/mL）：准确称取β-胡萝卜素标准品50mg（精确到0.1mg），用正己烷定容至100mL棕色容量瓶中。注：α-胡萝卜素标准储备液需要-10℃以下避光储存，使用期限不超过3个月。标准储备液用前需校正，具体操作见附录A。3.4.5α-胡萝卜素标准中间液（100g/mL）：从α-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0mL溶液于50mL棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度。3.4.6α-胡萝卜素和β-胡萝卜素混合标准工作液：分别从α-胡萝卜素标准中间液和β-胡萝卜素标准中间液中准确移取0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL溶液至5个100mL棕色容量瓶，得到浓度为α-胡萝卜素和β-胡萝卜素浓度均为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL的系列混合标准工作液。4仪器与设备4.1高效液相色谱仪，带紫外检测器。4.2旋转蒸发器。4.3恒温磁力搅拌器：20℃～80℃。4.4离心机：转速≥5000rpm。4.5分析天平：感量为0.1mg。4.6氮吹仪。4.7恒温水浴箱：控温精度±1℃。5分析步骤5.1试样制备谷物、豆类、坚果等试样需粉碎、研磨、过筛（筛板孔径0.3mm～0.5mm)；蔬菜、水果、蛋、藻类等试样用匀质器混匀；谷粉、乳粉等试样用前振摇混合。4℃冰箱可保存1周。5.2试样处理5.2.1无添加-胡萝卜素的试样称取粉碎或匀浆混匀的试样（约含β-胡萝卜素20μg，精确至0.001g）于250mL锥形瓶中，加入1g抗坏血酸，加入75mL乙醇，60℃1℃水浴回流加热30min。5.2.2添加β-胡萝卜素的试样5.2.2.1高淀粉试样：称取混合均匀的试样（约含β-胡萝卜素20μg，精确至0.001g）于250mL三角瓶中，加入1.0g抗坏血酸，固体试样需用50mL45℃～50℃的水溶解并混合均匀。加入lgα-淀粉酶，向三角瓶中充氮后盖上瓶塞，置60℃±2℃培养箱内酶解30min。5.2.2.2非淀粉类试样：称取混合均匀的试样（约含β-胡萝卜素20μg，精确至0.001g），置于250mL三角瓶中，加入1.0g抗坏血酸，固体试样需用50mL45℃～50℃的水溶解并混合均匀。5.3待测液的制备5.3.1皂化5.3.1.1无添加-胡萝卜素的试样:将25mL氢氧化钾溶液加入到试样溶液中，放入磁力棒，充入氮气排出空气，盖上胶塞。将1000mL的烧杯中加入约300mL的水，将烧杯放在恒温磁力搅拌器上，当水温控制在53℃±2℃时，将三角瓶放入烧杯中，磁力搅拌皂化约30min后，取出立刻冷却到室温。5.3.1.2添加β-胡萝卜素的试样:95%乙醇加入到添加β-胡萝卜素的试样溶液中，混匀并加入...