收稿日期:2009-07-30;修订日期:2009-09-26基金项目:生物资源保护与利用湖北省重点试验(湖北民族学院开放基金项目;湖北省教育厅重点项目(D20081010作者简介:杨兰芳(1964-,男,博士,副教授,湖北来凤人,研究方向:土壤物质循环及其环境效应。Tel:189********,E-mail:lfyang@hubu.edu.cn紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性杨兰芳1,曾巧1,2,李海波1,闫静静1(1.湖北大学资源环境学院,湖北武汉430062;2.中国科学院寒区旱区环境与工程研究所,甘肃兰州730000摘要:土壤过氧化氢酶是土壤中非常重要酶类,为了探索一种测定土壤过氧化氢酶活性的简单、可靠而适用的测定方法,我们进行了利用紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性的方法研究。结果表明,紫外分光光度法重现性优于高锰酸钾容量法,溶液在240nm处的吸光度可以稳定11小时以上,对4种土壤分析表明,紫外分光光度法的测定结果与高锰酸钾容量法之间无显著差异。传统高锰酸钾容量法加酸后再过滤容易导致溶液有颜色,过滤液易浑浊,过滤时间长。本试验表明,在过滤前加入饱和铝钾矾,然后直接将溶液过滤到盛有酸的容器内,既可以使溶液无色,又能使溶液澄清透明,还能使过滤速度大为加快。总之紫外分光光度法重现性好、稳定时间长,操作简单,不需要特殊试剂,避免了容量法的滴定误差,是一种值得推广普及的测定土壤过氧化氢酶活性的好方法。关键词:紫外分光光度法;土壤;过氧化氢酶;容量法中图分类号:S151.9文献标识码:A文章编号:0564-3945(201101-0207-04土壤通报ChineseJournalofSoilScienceVol.42,No.1Feb.,2011第42卷第1期2011年2月土壤酶活性是土壤生物活性和土壤生化反应强度反映[1],也是土壤肥力水平的反映,土壤中的生化反应过程和养分形态的转化一般都是在土壤酶的参与下进行的。土壤酶主要来源于土壤微生物的活动和植物分泌物,土肥力水平[2]、土壤污染状况[3,4]以及土壤对环境变化的响应[5]都会影响土壤酶活性。通过分析土壤酶活性可以评价土壤土壤微生物活性、生物化学反应程度、土壤肥力水平和土壤污染状况。过氧化氢酶是生物呼吸、生物代谢过程,以及土壤动物、植物根系分泌及残体分解[6,7]中的重要酶类,在生物体(包括土壤中,过氧化氢酶的作用在于破坏对生物体有毒的过氧化氢[8]。因此无论研究土壤、植物,还是动物过氧化氢酶都具有重要意义。一种快速、简便、准确测定过氧化氢酶活性的方法无疑对过氧化氢酶的研究具有促进作用。测定土壤过氧化氢酶活性主要是基于测定过氧化氢与酶作用后释放出的氧和测定剩余的过氧化氢两方面。利用紫外分光光度法直接测定土壤过氧化氢酶活性的方法目前尚未见报道。本试验探索一种利用紫外分光光度法直接测定土壤过氧化氢酶活性的方法,本方法的成功将有助于土壤过氧化氢酶分析和研究。1材料与方法1.1土壤材料试验所用土壤材料为红壤1、红壤2、山地黄壤和山地暗黄棕壤。红壤1和红壤2采自武汉市鲁磨路南望山山脚的荒芜耕地,山地黄壤采自庐山三宝树附近,山地暗黄棕壤采自庐山博物馆旁边。土壤采回后在实验室内挑出根系等植物残体和岩石碎块,自然风干后过1mm筛备用。所用土壤之基本理化性质如表1。1.2所用试剂与仪器(10.3%的H2O2:取30%的H2O2试剂稀释100倍即可,溶液准确浓度用高锰酸钾标定。(21.5molL-1硫酸:取42ml浓硫酸,稀释后定容至500ml。(3饱和铝钾矾:铝钾矾即明矾(KAl(SO42·12H2O在20℃溶解度为10.84g,30℃的溶解度为15.41g.(40.01蚪虔molL-1高锰酸钾:称取3.16g高锰酸钾(KMnO4溶解后定容至1L,其准确浓度用标准草酸钠标定。(5紫外分光光度计:UV-9100,北京瑞利分析仪器有限公司。(6震荡器:ZD-8801回转振荡器,上海康华生化仪器制造厂。土壤Soil红壤1红壤2黄壤黄棕壤有机质Organicmatter(gkg-113.5016.1424.15110.97碱解氮AvailableN(mgkg-183.7598.14169.10487.65有效磷AvailableP(mgkg-111.945.460.502.53pH5.585.764.474.20CEC(Cmol(+kg-112.3410.7315.7227.42表1供试土壤基本理化性质Table1Thebasicsoilpropertyinexperiment第42卷土壤通报1.3方法1.3.1紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性(1测定原理过氧化氢酶能酶促过氧化氢分解生成水和氧气。通过加入定量过量的过氧化氢,与土壤作用一段时间后,加入量与...