ShanghaiFenglinClinicalLaboratoryCo.,Ltd.上海枫林医药医学检验有限公司SOPFileCode文件编号：FL-SOP-CL-6007TITLE:StandardoperationprocedurefordetectionofnucleicacidofhumanpapillomaviruswithPCR-flowfluorescenceassay文件名称：人乳头瘤病毒核酸分型检测标准操作规程WRITTENBY/DATE编写者：罗孝伟日期：2012-07-20REVIEWBY/DATE审阅者：黄永富日期：2012-07-20APPROVEDBY/DATE批准者：日期：REVISIONDATE修订日期：2011-12-31NewFormat/RevisionNumber新版/修号：2/0REPLACENUMBER被替代版号:1/0EFFECTIVEDATE:生效日期：1.IntendedUse目的通过病毒核酸扩增定性检测人体宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒分型。2.SphereofApplication适用范围人乳头瘤病毒分型定性检测。3.PrincipleofTest检验方法及原理采用多重PCR技术对检测样品的核酸DNA进行扩增，并用包被有核酸探针的多种编码微球和扩增产物进行杂交，结果用流式阵点仪检测分析。流式荧光杂交法是将PCR扩增产物盒微球液进行混和，并经过杂交、荧光素标记、Luminex流式分析仪阅读得到相应的检测结果。微球杂交液中包含多种荧光编码微球，每种荧光荧光编码微球的表面都共价交联有与亚型对应的寡核苷酸探针，在杂交过程中探针特异性识别并结合PCR产物中的靶序列，经过和荧光素反应后形成微球-探针-扩增产物-荧光素的复合物，经Luminex流式分析仪阅读时，可获得每种复合物的微球编码及其对应的荧光强弱信号，最后经过透景HPV专用的分析软件判读相应的检测结果。4.SpecimenCollection使用的样本4.1.样本种类：阴道或尿道分泌物。4.2.收集方法：医护人员先以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去。取出宫颈刷置于宫颈口，单方向旋转4-5周以获得足量的上皮细胞样本，然后将宫颈刷头部放入洗脱管中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，旋紧洗脱管盖，做好样本标识，保持洗脱管直立放置。4.3.病人准备要求：月经正常妇女，在月经来潮后10-18天为最佳检查时间；检查前三天内不要作阴道冲洗，不要用避孕药膏等阴道内用药物；检查前24小时不应有性行为；检查前不进行醋酸或碘液涂抹。4.4.样本容器的要求：专用样本保存液的容器。4.5.样本用量：50-200μl，应保证有足够的量用于检测。4.6.拒收样本的规定：除阴道或尿道分泌物以外的样本，应予以拒收。4.7.样本的处理方法：高速冷冻离心机13000转/min离心5min备用。4.8.样本的储存规定：室温冷藏（2-8℃）冷冻（-20℃）冷冻（-70℃以下）复融新鲜样本12小时7天3个月长期保存1次样本的运输采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输，在途时限不宜超过48小时样本储存应在检测完成7天内储存，不得超过7天4.9.样本的外送规定：4.9.1.仪器故障不能立即维修及试剂断货导致不能在报告周期内准时发出检测报告时，样本可外送至其他有医疗资质的单位进行检测。4.9.2.样本结果可疑或与临床不符时，样本可外送至其他有医疗资质的单位进行复查比对。5.Reagents，calibrators，qualitycontrol试剂、标准品、质控品5.1.试剂、标准品/校准品、质控品的产品名5.1.1.试剂：上海透景生命科技有限公司高危型人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒（流式荧光杂交法）。5.1.2.标准品/校准品：N/A5.1.3.质控品：上海透景生命科技有限公司。5.2.试剂、标准品/校准品、质控品的组成及包装规格5.2.1.主要试剂组成成分：组成成分数量规格核酸提取组份核酸提权缓冲液1瓶12mL核酸扩增组份引物混合液2管150uLPCR预混液2管300L聚合酶1管48uL质控品1管200uL杂交组份微球杂交液1瓶1.2mLSA-PE1管4mL5.2.2.标准品/校准品：N/A5.2.3.质控品：200μl×1支。5.3.试剂、标准品/校准品、质控品稳定性与贮存名称储存条件机载稳定性准备试剂杂交组份于2-8℃避光、防冻保存；核酸提取组份于室温或2-8℃保存；核酸扩增组份于-20℃以下冷冻存放；试剂盒有效期为6个月。N/A冻存试剂室温融化并振荡混匀后，2000rpm离心10秒钟。标准品/校准品N/AN/AN/A质控品-20℃以下冷冻存放至有效期截止日期。N/A室温放置至少15分钟使其充分复融，颠倒或旋涡振荡混匀后使用。6.Instrument仪器6.1.美国ABI7500实时荧光定量PCR仪；6.2.新加...