《禽流感病毒分型基因芯片检测操作规程》编制说明一、任务来源本标准由国家认证认可监督管理委员会《2007年国家标准制定和修订项目》下达任务，项目序号20072034-T-326，编写单位为中国检验检疫科学研究院。二、制定本标准的目的和意义1.禽流感的危害禽流感是国际兽疫局（OIE）确定的A类动物疫病，并被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。禽流感的爆发一直是困扰全球养禽业的一个难题，尤其是高致病性禽流感可导致高达100％的发病率和死亡率，并可感染人并致人死亡。从1959年第一次报道H5亚型的高致病性禽流感暴发以来，高致病性禽流感共有24次较大的流行，其中19次是在家禽中爆发，且每次都带来重大经济损失。禽流感的暴发几乎波及世界各地。多个国家先后爆发禽间高致病性禽流感疫情，并且出现人间禽流感疫情，全球共有近400多人感染禽流感，病死率达51.7%。禽流感的爆发不仅给世界各国的畜牧生产和国际贸易带来了巨大的经济损失，而且严重威胁着人类健康。截至2008年2月26日，全国有新疆、辽宁、四川、广东、广西、江西、湖南、湖北、浙江、安徽、江苏等省市和地区发生人感染禽流感病事件，导致18人死亡。对此,各种新闻媒体进行了连篇累牍的报道，香港、澳门等地区高度关注，部分贸易国和地区也采取了相应的限制措施。禽流感（AvianInfluenza，AI）是由流感病毒属的A型流感病毒（InfluenzavirusA）引起的禽类感染和疾病的总称。禽流感病毒为正黏病毒科（Orthomyxoviridae）的A型流感病毒，A型流感病毒血清型众多，有16个HA(hemagglutinin)亚型和9个NA(neuraminidase)亚型，其核酸有8个基因组片断，可随机互相交换，因此，抗原变异性强，不断发生抗原飘移和抗原转变，不同亚型、不同分离株病毒的差异很大，低致病性的也有可能转变为高致病性的，宿主范围又广范，各亚型间几乎没有交叉保护性，使得禽流感难以控制和频繁暴发。目前在全世界各种家禽和野生禽类中，已分离到上千株禽流感病毒。2.制定禽流感病毒分型基因芯片检测方法标准的背景和要求禽流感疫情的发生，使各个贸易国家及国际组织极其关注，对我国经济和社会发展造成了重大影响，国家有关领导对禽流感疫情高度重视，在调查了疫情以后，立即采取了相关应急措施，并将此次疫情的发生情况及采取的应急措施向有关贸易国进行了通报，要求加强对禽流感快速检测技术的研究，增加对禽流感的检疫检测，并尽快制订相关的标准，防止禽流感的传入传出。目前在禽流感检测技术方面的研究已经非常广泛而深入，作为国家标准的诊断技术与检测方法就有13项之多。但由于禽流感病毒有16个血凝素亚型和9个神经氨酸酶（NA）亚型，现有的标准都只能确定部分血凝素亚型（H5、H7、H9），而无法确定和区分禽流感病毒25个亚型，缺乏更加全面系统的监控禽流感的检测技术。禽流感病毒分型基因芯片检测技术可同时检测25个亚型，并能较早发现新的流行亚型，起到有效监控禽流感疫情的作用。目前国内外还没有禽流感病毒的基因芯片检测技术的相关行业标准与国家标准公布，因此，尽快制定禽流感病毒的基因芯片检测技术相关国家标准，规范禽流感病毒快速分型基因芯片检测方法，不仅有助于满足检疫需要，防止禽流感病毒其它亚型传入我国，而且为禽流感有效监控和新流行亚型的检测提供技术储备。3．有关检测方法的优缺点禽流感的主要诊断及检测方法主要包括病原学、免疫学、分子生物学三个方面：AIV的分离和HA/HI试验是经典的实验室诊断方法，结果可靠但时间太长；琼脂扩散（AGP）试验由于具有简便快速的特点，但此法的敏感性较低；中和试验（NT）准确且易操作常用于实验室诊断，但需较长的时间和花费较多的材料；荧光抗体（FA）试验具有快速、简便、易行、较敏感等特点，也常用于临床诊断；免疫酶标记技术（EIA）以酶联免疫吸附试验（ELISA）为主，尽管其重复性和稳定性有待提高，但具有快速、敏感度高（其敏感度要高于AGP试验和HI试验）的特点，常用于大批样品和血清学检测检疫。禽流感病毒的实时RT-PCR方法也具有快速敏感的特点。然而，这些方法大多是针对H5N1或H9等几个有限的亚性，这些方法无法实现多个亚型的同时区分与鉴定。基因芯片技术是20世纪90...