人结直肠癌干细胞微球体培养及鉴定

四川大学学报(医学版)JSichuanUniv(MedSciEdi)人结直肠癌干细胞微球体培养及鉴定周继幫,龚日祥2,陈向征】,周海俊】,朱亚和,刘素柑,黄妍,毕锋仏1-四川大学华西医院肿席中心腹部肿瘤科(成都610041),2.四川大学华西医院普外科【摘要】目的探索结直肠癌细胞系干细胞微球体培养方法,并对Colo205细胞微球体是否具有肿瘤干细胞特性进行鉴定。方法结直肠癌Lovo、Colo205及SW48O细胞在含生长因子无血清培养基(SFM〉中悬浮培养。流式细胞术、裸鼠成瘤实验.Transwell小室实验分别检测Colo205细胞及其微球体表面标记分子CD133、CD44表达,体内成瘤能力和体外侵袭能力.微球体细胞在含血清培养基中贴壁培养后流式检测CD44分子表达变化。RT-PCR分析Colo205细胞及其微球体CD44、Musashi-l及Oct4mRNA的表达.结果3种细胞系均能在特殊配制的SFM中形成可以稳定传代的微球体,SFM新鲜配制、用细胞分离剂Accutase替代胰酶传代以及保持细胞的悬浮状态均有利于微球体的形成和増殖。Colo205微球体中CD44+细胞比例显著增多,贴壁分化后逐渐减少至与Colo205细胞无明显差异.与Colo205细胞相比,微球体具有更强的侵袭能力和体内成瘤能力,并高表达干细胞标记分子Musashi-1及OCMERNA.结论利用特制SFM悬浮培养可得到结直肠癌细胞系微球体,这种微球体富集了肿瘤干细胞。【关键词】结直肠癌肿瘤干细胞微球体无血清培养基悬浮培养【中图分类号】735.34CultivationandCharacterizationofTumorSpheresGeneratedfromHumanColorectalCancerCellLinesZHOUJi-tao•GONGRi-xiang>CHENXiang-zheng,ZHOUHai-jun9ZHUYa-jie^LIUSu-rui^HUANGJuan9BIFeng^.DepartmentofAbdominalCancer9CancerCenter»WestChinaHospital♦SichuanUniversity9Chengdu610041,China(Abstract]OtyectiveTostudyonthecultivationmethodfortumorspheresfromcolorectalcancercelllinesandidentifywhetherresultingColo205spheroidcellsdisplaycancerstemcellcharacteristics.MethodsLovo・Colo205andSW480cellswereseededinserumfreemedium(SFM)withEGFandbFGF.Flowcytometryanalysis*cellinvasionassayandxenograftexperimentwereappliedtoexaminethecellsurfacemarkerexpressionpattern,cellinvasiveabilityandinvivotumorigenicityofbothColo205spheresandparentalcells.CD44expressionoftumorspheroidcellswasalsoanalyzedafterculturedwithserumsupplementedmediumbyflowcytometry.CD44»Musashi-1andOctAmRNAweredetectedinthesetwocellsbyRT-PCR.ResultsTumorspherescouldbegeneratedfromthreecolorectalcancercelllinesinSFM.TheformationandproliferationoftumorsphereswerebenefitedfromfreshSFM,celldissociationreagentAccutaseandthefloatingstatusofcancercells.TheoverwhelmingmajorityofspheroidcellswereCD44*cells.ButCD44十cellsweregraduallydecreasedwhenspheresculturedwithserumsupplementedmedium.Colo205sphereshavehigherMusashi-1andOc£4mRNAexpression»tumor-initiatingcapabilityandinvasiveabilitycomparedwiththoseofparentalcells.ConclusionTumorspheresinwhichenrichcancerstemcellscanbegeneratedandmatainedfromcolorectalcancercelllinesinSFMonfloatingculturecondition.【Keywords}ColorectalcancerCancerstemcellTumorspheresSerumfreemediumFloatingculturesystem2009;40(5):918一922肿瘤中存在一小群细胞,其分化缓慢,具有与干细胞相似的自我更新能力和分化潜能,只有这群细胞才能形成肿瘤即肿瘤干细胞或肿瘤起源细胞。肿瘤干细胞具有高转移性和抵抗放化疗的待性,是恶性肿瘤转移、复发的根源“②。富集、培养肿瘤干△Correspondingauthor*E-mail:bifeng@medmaiLcom.cn细胞是深入研究其分子机制需解决的关键问题。结直肠癌发病率高,且呈逐年上升的趋势,严重威胁着人类身体健康。有学者用无血清悬浮培养法得到富含结直肠癌干细胞的微球体,为结直肠癌干细胞研究提供了新的思路⑶5然而,目前关于微球体培养的材料、方法和技术报道不一。本研究旨在探索多种结直肠癌细胞系微球体培养方法,并...

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