优化图书馆室内空间布局［摘要］目的：在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位，并对其诊断敏感性进行评价。方法：人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124147)的寡核苷酸序列，克隆入外源抗原表位表达载体系统FHVRNA2I3位点，构建重组质粒，在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和Westernblot检测表达产物的抗原性，并以表达产物为包被抗原,通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗HBs。结果：嵌和蛋白可与抗HBs特异性结合，其ELISA检测抗HBs阳性率为77.5%，Westernblot的为68%，而对照试剂盒的为62%。结论：在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性，有诊断应用价值。［关键词］HBV;抗原表位;抗原性;FHVRNA2载体系统StudyonAntigenicityofHBVRecombinantEpitopeAbstract：ObjectiveConstructionandExpressionHBVrecombinantepitopeinaforeignepitopepresentingvector，andevalutionofdignosticsensitivityforantiHBswithHBVepitope.MethodsOligonucleotidsencodedtwentyfouraminoacids(aaS124147)whichiswithin"a"antigenicdeterninantweresynthesizedandinsertedintoaforeignepitopepresentingcarrierI3site(FHVRNA2cDNAI3).HBVepitopewasexpressedinaprokaryoticcellularsystem(BL21cell).TheexpressionproductwasanalyzedanditsantigenicitywasfurtherstudiedbyELISAandWsternblotmethodwithchimericproteinascoatingantigen.weusedchimericproteinascoatingantigentotestantiHBswithELISAandWsternblotin58seralsamples.ResultsThechimericproteinreactedwithantiHBsseralspecially.ThedetectionpositiveratioofantiHBsis77.5%and68%respectivelybyELISAandWsternblotwithchimericproteinascoatingantigen,thecontrol'swas62%.ConclusionHBVepitopeexpressedinaforeignepitopepresentingcarrierpossessedgoodantigenicityanddiagnosticvalue.---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---Keywords：HBV；Epitope；Antigenicity；FHVRNA2carriersystem乙型肝炎病毒(HBV)是乙型肝炎的病原体，并引起慢性肝炎和肝硬化，而且与肝癌的发生密切相关。迄今，对HBV感染最有力的预防和控制措施，仍是发展疫苗。FHVRNA2载体系统［1］是一个以昆虫小RNA病毒flockhousevirus外壳蛋白为载体的新型抗原表位表达载体，此系统中表达的载体蛋白可自动组装成病毒样颗粒，使插入的外源抗原表位可以暴露在颗粒的表面，保持天然构象和免疫学特性。本研究拟将HBVa抗原表位插入到FHV外壳蛋白上，并对其抗原性及诊断意义进行了研究。1材料与方法1.1细胞重组质粒DNA大肠杆菌DH5α用于重组质粒pETEDNA的克隆和扩增。大肠杆菌BL21(DE3)用于重组质粒pETEDNA的表达。质粒DNA在含200μg/ml氨苄青霉素的LB或TB培育中生长，FHVRNA2载体系统即重组pETFHV构建见［1］。1.2HBV抗原表位及重组pETE的构建和表达1.2.1HBV抗原表位及重组pETE的构建人工合成HBV特异抗原表位E(氨基酸序列：124CTTPAQGNSMFPSCCCTKPTDGNC147)寡核苷酸序列：正向5’GATGCACGACTCCTGCTCAAGGCAACTCTATGTTTCCCTCATGTTGCTGTACAAAACCTACGGATGGAAATTGC3’；反向3’CTACGTGCTGAGGACGAGTTCCGTTGAGATACAAAGGGAGTACAACGACATGTTTTGGATGCCTACCTTTAACG5’，两端为Bsu36I识别位点，与经Bsu36I作用后的重组pETFHVDNA混匀后置室温连接2h,转化DH5α细胞，接种LB平板(200μg/mlAmp)培养。重组质粒pETEDNA经酶切筛选并经DNA序列测定。1.2.2携带HBV抗原表位的嵌和蛋白的表达重组pET系统中，嵌和蛋白的表达受T7启动子的控制［2］。BL21经重组pETEDNA转化后，在TB培养液中37℃生长16h～18h,细胞经4000r/10min离心沉淀,用超声裂解缓冲液悬---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---浮，超声裂解，裂解液经离心，弃上清，沉淀(包涵体)用8mol/L尿素溶解。1.2.3SDSPAGE及Westernblot分析方法见前文［1，3］，3，3二氨基苯胺四氢盐酸(DAB)底物试剂为AMRESCO...