第23卷第5期湖南农业大学学报Vol.23No.51997年10月JournalofHunanAgriculturalUniversityOct.1997用紫外分光光度法直接测定蔬菜中维生素C的含量刘军鸽王增盛(湖南农业大学中心实验室,长沙,410128【摘要】根据Cu(Ⅱ在室温下催化氧化V-C的原理[1],在pH6,测定吸收波长为267nm处,用紫外分光光度法直接测定蔬菜中的V-C含量,与常规方法比较,结果基本一致.而且这一方法具有快速、稳定、试剂易得、易保存等特点.【关键词】紫外分光光度法测定蔬菜维生素C【中图分类号】Q564-331蔬菜中V-C含量的测定一般采有2,6-二氯靛酚滴定法、碘量法、2,4-二硝基苯肼法和萤光分光光度法等[1].这些方法都有所用试剂不稳、操作程序复杂、费时等缺点.作者采用紫外分光光度法直接测定蔬菜中的V-C含量(简称直接法,取得了好的效果,现介绍如下.1材料与方法1.1试剂与仪器V-C贮存液:1mg/mL.V-C工作液由V-C贮存液稀释而得,每天新配.Cu(Ⅱ溶液:5g/mL(pH6.取1mg/mLCu(Ⅱ溶液5.0mL,加入200mL1mol/L醋酸钠溶液和7mL1mol/L醋酸溶液,用水稀释至1L,摇匀.Cu(—EDTA(6.2×10-5mol/LⅡ溶液:Cu(Ⅱ溶液与5×10-4mol/LEDTA溶液混合制成(体积比为41,临用新配.实验用试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水.实验仪器:7520型分光光度计(上海分析仪器厂生产;DU-7型扫描紫外分光光度计(美国Backman生产.1.2供试样品苦瓜、萝卜、南瓜、辣椒(青,均购自湖南农业大学集贸市场.1.3方法操作步骤:(1样品用果汁机获得蔬菜汁或加适量水匀浆,于1000r/min下,离心10min,取上清液,视V-C含量及样液颜色确定稀释倍数,一般2~6倍.(2取两支试管,各加1.0mL稀释样品液,一支试管中加入5.0mLCu(-EDTAⅡ溶液,立即在267nm波长处测定吸收度,标记为A(;Ⅰ另一支试管中加入4.0mL5g/mL的Cu(Ⅱ溶液,室温下放15min后,再加入1.0mL5×10-4mol/LEDTA溶液,于267nm波长处测定吸收度,标记为A(;Ⅱ用公式6F[A(-A(]/SⅠⅡ计算样品中V-C的含量,其中F为稀释系数,S为标准曲线的斜率.标准曲线的制备:取不同量的V-C标液配制成标准溶液(0~20g/mL,取标准溶液第一作者刘军鸽,女,39岁,实验师.收稿日期:1997-01-071.0mL于干燥试管中,并加入5.0mLCu(-EDTAⅡ溶液,摇匀,以试剂为空白,立即于267nm波长处测吸收度,求得线性回归方程:y=0.087x-0.0089x,r=0.9998,S=0.087.2结果与讨论2.1吸收曲线按试验方法用苦瓜稀释液和标样绘制吸收曲线(附图.由附图可见,最大吸收波长在267nm处,且样品和背景的吸光度有一差值,可作定量依据.2.2酸度对吸收波长的影响实验结果表明,不同pH值下,V-C的最大吸收波长会有所变化.当pH<4时,最大吸收波长紫移,这可能是由于V-C此时以离子化形式存在而造成的.当pH>12时,最大吸收波长红移,很明显这是由于V-C在碱性环境中不稳定分解而引起的.pH值在5~10时的最大吸收波长不变,为267nm,但pH6时的吸收值最大,故选择最佳pH值为6.附图标样和样品的吸收曲线Fig.AbsorptioncurveofvitaminCandSamplesⅠ.标样的吸收曲线;Ⅱ.样品+[Cu(-EDTA]Ⅱ的吸收曲线;Ⅲ.[样品+Cu(]+EDTAⅡ的吸收曲线.2.3回收率对2种不同的蔬菜(苦瓜和萝卜样品,用本法进行回收试验,每个样品一式四份.结果如表1所示.可看出回收试验结果良好.表1回收率Table1Recovery样品含量/mg100g-1加入量/mg100g-1测得量/mg100g-1平均回收率/%苦瓜60.250109.4098.4萝卜19.65069.1599.12.4与滴定法和萤光法分析结果比较样品按实验方法测定,测定结果用2,6-二氯靛酚滴定法及萤光分光光度法进行核对,效果满意(表2.表23种方法样品分析结果比较Table2ComparsionofresultsdeterminedwiththreedifferentmethodsV-C含量/mg100g-1样品名称直接法滴定法萤光法苦瓜Ⅰ60.261.459.8苦瓜Ⅱ81.580.180.5南瓜Ⅰ6.516.86.50南瓜Ⅱ4.234.44.31475第23卷第4期刘军鸽等用紫外分光光度法直接测定蔬菜中V-C的含量476湖南农业大学学报1997年8月参考文献1黄伟坤编著.食品检验与分析.北京:中国轻工业出版社,1989.96~1042Oi-washLau,Shiu-FaiLuk,Kit-SumWong.Derminationofascorbicacidinpharmacuticalsusingdirectul-travioletspectrophotometry.Analyst,1987,112:1023DETERMINATIONOFVITAMINCCONTENTINVEGETABLESWITHULTRAVIOLETSPECTROPHOTOMETRYLiuJungeWangZengsheng(CentralLaboratory,HNAU,Changsha,410128ABSTRACTAsimple,rapidandaccurateultravioletspectrophotometricmethodwhichisbasedontheCu(-catalysedoxidationofvitaminCattheroomtemperaturehasbeende-velopedfoⅡrthedeterminationofvitaminCcontentinvegetables.Measurementsoftheab-sorbanceweremadeat267nmandpH6.Whentheproposedmethodwasappliedtodetermi-nationofvitaminCcontentinvegetables,theresultsobtainedweresimiliartoonesdeter-minedwiththetitrationof2,6-dichloroindophenolorfluorometry.KEYWORDSultravioletspectrophotometrydeterminationvegetablesvitaminC
