纳米级多孔负载人骨形成蛋白2基因修饰支架对前成骨细胞株分化的影响阮蔷，赵刚，郭睿，肖月，李超(佳木斯大学口腔医学院，黑龙江省佳木斯市154007)引用本文：阮蔷，赵刚，郭睿，肖月，李超.纳米级多孔负载人骨形成蛋白2基因修饰支架对前成骨细胞株分化的影响[J].中国组织工程研究，2016，20(38):5657-5663.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.38.005ORCID:0000-0002-4322-1423(阮蔷)文章快速阅读：阮蔷，女，1988年生，内蒙古自治区包头市人汉族，佳木斯大学在读硕士，主要从事正畸方面的研究。通讯作者：赵刚，硕士生导师，副教授，佳木斯大学口腔医学院，黑龙江省佳木斯市154007中图分类号:R318文献标识码:A文章编号:2095-4344(2016)38-05657-07稿件接受：2016-07-10文题释义：高浓缩成骨基因聚合物：为高浓缩人骨形成蛋白2基因修饰的β-磷酸三钙/胶原复合材料，具有良好生物相容性、骨诱导和骨传导性佳，是很有潜力的新型骨缺损修复材料，而高浓缩更大程度上有利于成骨能力。DNA支架：在两种具有互补特性的生物可降解材料多孔壁β-磷酸三钙/胶原复合的研究基础上，通过阳离子多聚体的静电作用将带负电荷磷酸基团的DNA固定于支架上，设计编码骨形成蛋白2的DNA释放蛋白传递系统。就是缓释材料包裹生物活性因子或以生化技术将人骨形成蛋白2基因转染至质粒、腺病毒及脂质体等基因载体，经种子细胞或成骨细胞吞噬后，表达骨形成蛋白产物。摘要背景：对于骨缺损，通常需要通过骨组织或成骨材料的移植或充填进行修复。切取自体骨组织会给患者带来额外的损伤和继发畸形，为此，新一代的成骨材料研究迫在眉睫。目的：构建含人骨形成蛋白2质粒DNA的β-磷酸三钙/胶原支架材料，并观察其对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1分化的影响。方法：制备纳米级多孔β-磷酸三钙/胶原支架并负载含人骨形成蛋白2目的基因的质粒DNA形成基因修饰的支架材料。建立小鼠前成骨细胞细胞株MC3T3-E1与复合支架的体外培养体系。将其分为支架组和平皿组，再根据质粒的浓度每组再分为2个小组。复合培养后取样通过扫描电镜和光镜进行细胞形态学观察；诱导1，3，7，14d行茜素红染色观察钙结节情况；实时荧光定量PCR检测细胞周期；诱导1，3，7，14d观察成骨细胞相关基因Ⅰ型胶原αⅠ链基因、锌指结构转录因子、骨唾液酸蛋白的表达。结果与结论：①含人骨形成蛋白2为目的基因的质粒DNA修饰纳米β-磷酸三钙/Ⅰ型胶原溶液复合材料上细胞黏附数、分化数量及材料表面分布都高于单纯含人骨形成蛋白2为目的基因的质粒DNA(P<0.05)；②通过用茜素红染色、实时荧光定量PCR检测，结果显示支架组对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨能力的影响优于平皿组；③结果提示，负载人骨形成蛋白2基因修饰的β-磷酸三钙/胶原支架材料将具有骨传导性的支架与具有生物活性的成骨因子复合，形成复合支架同时具备骨传导性和骨诱导性，是一种理想的骨缺损修复材料。关键词：生物材料；骨生物材料；人骨形成蛋白2；β-磷酸三钙/胶原；分化；骨缺损；黑龙江省自然科学基金高浓缩成骨基因聚合物包裹DNA支架对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨能力的影响A：纳米级β-磷酸三钙倒置显微镜下观察细胞形态茜素红染色检测钙结节情况(第1，3，7，14天)Real-TimePCR检测成骨相关基因的表达情况(第1，3，7，14天)B：Ⅰ型胶原溶液C：含人骨形成蛋白2为目的基因的液体质粒DNA小鼠前成骨细胞平皿组C支架组A+B+C实验结果：负载人骨形成蛋白2基因修饰的β-磷酸三钙/胶原支架材料具有良好的生物相容性，优良的骨诱导性和骨传导性，是一种理想的骨缺损修复材料RuanQiang,Studyingformaster’sdegree,SchoolofStomatology,JiamusiUniversity,Jiamusi154007,HeilongjiangProvince,ChinaCorrespondingauthor:ZhaoGang,Master’ssupervisor,Associateprofessor,SchoolofStomatology,JiamusiUniversity,Jiamusi154007,HeilongjiangProvince,China主题词：骨形态发生蛋白质类；胶原；细胞分化；组织工程基金资助：黑龙江省自然科学基金项目(H201487)；佳木斯大学研究生创新项目(LZR2015_015)Effectsofnanoporousbeta-tricalciumphosphate/collagenscaffoldmodifiedwithhumanbonemorphogeneticp...