ｄｏｉ１０．３９６９ｊ．ｉｓｓｎ．１６７克拉维酸钾中有关物质Ｇ的化学合成与结构鉴定陈仿１，靳孝庆１，曹广祥１，张晓晓１，王珊珊２，钟传青２摘要：以Ｌ－酪氨酸和琥珀酸酐为原料、氯化锂为催化剂、冰醋酸为反应溶剂合成了药品克拉维酸钾中的有关物质Ｇ。研究了反应溶剂的种类、反应物料配比、反应温度、反应时间等因素对有关物质Ｇ收率及纯度的影响，在Ｌ－酪氨酸和琥珀酸酐的摩尔比为１∶１．５、９５℃加热反应１．０ｈ的优化条件下，有关物质Ｇ粗品的最高纯度达到８７．４％，收率为８５．７％。通过制备液相色谱对粗品进行纯化，有关物质Ｇ的纯度达到９９．６％，总收率为６８．６％。采用ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ对所合成物质进行了结构鉴定，确定其为欧洲药典中克拉维酸钾的有关物质Ｇ。关键词：克拉维酸；有关物质Ｇ；化学合成；结构鉴定中图分类号：Ｒ９７８．１１文献标识码：Ａ文章编号：１６７２－５４２５（２０１３）０１－００８４－克拉维酸（Ｃｌａｖｕｌａｎｉｃａｃｉｄ）是一种不可逆性竞争型β－内酰胺酶抑制剂，可与β－内酰胺酶的丝氨酸活性位点不可逆结合，从而保护β－内酰胺类抗生素的活性［１，２］。随着细菌耐药性的不断增强，克拉维酸在临床上的应用越来越广泛，最成功的例子就是葛兰素公司的Ａｕｇｍｅｎｔｉｎ（克拉维酸钾与阿莫西林的复合制剂）［３，４］。克拉维酸钾一般采用发酵法生产，生产过程中始终存在Ｎ－琥珀酰酪氨酸（结构式见图１），在欧洲药典中标识为有关物质Ｇ，并且不容易在提取过程中去除［５］。随着人们对药品质量的要求越来越高，有关物质Ｇ因为对药品质量影响很大，其含量要求也法和提高克拉维酸钾药品质量提供帮助。实验１主要试剂与仪器Ｌ－酪氨酸（生物纯）、琥珀酸酐（化学纯）、有关物质Ｇ标准品（ＣｏｕｎｃｉｌｏｆＥｕｒｏｐｅ－ＥＤＱＭＣＳ３００２６Ｆ－６７０８１ＳｔｒａｓｂｏｕｒｇＣｅｄｅｘ）、氯化锂、冰醋酸、乙酸乙酯、碳酸氢钾、无水乙醇、乙腈（色谱纯）、三氟乙酸、丁二酰氯、四氢呋喃、硫酸。所用试剂除注明外均为分析纯。Ｒ－１００１Ｎ型旋转蒸发仪，循环水式真空泵，ＨＤＭ－２５０Ｂ型电加热套，ＤＬＳＢ型低温冷却循环泵，梅特勒１．合成方法１．酸酐法１．２．称取７．８１ｇＬ－酪氨酸和６．００ｇ琥珀酸酐放入２５０ｍＬ三口烧瓶中，加入５０ｍＬ冰醋酸和０．２ｇ氯化锂，放入电热套中加热，常压下缓慢升温至９５℃，搅拌回流反应１．０ｈ。将反应液减压蒸馏至无液体滴出后，向三口烧瓶中加入５０ｍＬ纯水，搅拌溶解，再用５０ｍＬ乙酸乙酯萃取水相３次，合并乙酸乙酯相。将乙酸乙酯萃取液置于低温冷却循环泵中，－２０℃图１有关物质Ｇ的分子结构式ＴｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅＦｉ作者分别采用酸酐法和酰氯法合成克拉维酸钾有关物质Ｇ，并通过ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ对所合成物质进行了结构鉴定，以期为研究有关物质Ｇ的生成机制、控制方收稿日期：２０１２－０８－１４作者简介：陈仿（１９８２－），女，江苏邳州人，助理工程师，研究方向：生物制药工程；通讯作者：钟传青，博士，副教授，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｏｎｇｃｈｑ＠１６３．ｃｏｍ。８５陈仿等：克拉维酸钾中有关物质Ｇ的化学合成与结构鉴定／２０１３年第１期去除冰渣。向除水后的乙酸乙酯相中加入２０ｍＬ２０％碳酸氢钾溶液进行反萃，搅拌２０ｍｉｎ后，静置，分出重相液，向其中加入１Ｌ无水乙醇，室温下养晶１ｈ。抽滤，滤饼溶液的配制１．４．标准品溶液：精密称取克拉维酸钾有关物质Ｇ标准品适量，加水溶解并制成浓度约为０．１５ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，作为标准品溶液。供试品溶液：精密称取供试品适量，加水溶解并制成浓度约为０．１５ｍｇ·ｍＬ－１的溶样品检测１．４．取标准品溶液和供试品溶液分别进样，用外标法计算供试品含量。图２酸酐法合成有关物质Ｇ的化学反应式Ｆｉｇ．２Ｃｈｅｍｉｃａｌｒｅａｃｔｉｏｎ结构鉴定１．４．采用ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ对所合成物质进行结构鉴定。离子化方式：ＥＳＩ；离子模式：负离子；色谱柱：Ｉｎ－ｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）；流动...