牙周致病菌在患慢性牙周炎产妇脐带血中的检测【摘要】目的检测脐带血中的5种特异性牙周致病菌。方法收集64例患有慢性牙周炎（重度）产妇脐带血标本，采用Chelex-100法提取慢性牙周炎产妇脐带血中的DNA,并通过PCR分别检测脐带血中的牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,Pg)、伴放线放线杆菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans,Aa)、具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum,Fn)、中间普氏菌(Prevotellaintermedia,Pi)、福赛斯坦纳菌(Tannerellaforsythensis,Tf)5种牙周特异性致病菌。结果64例患有慢性牙周炎产妇脐带血中牙龈卟啉单胞菌(Pg)的检出率为31%,福赛斯坦纳菌(Tf)42%,中间普氏菌(Pi)26%,具核梭杆菌(Fn)21%,伴放线放线杆菌(Aa)23%。这几种细菌的PCR产物通过测序,结果与GenBank数据库中的序列进行比对同源性达99%~100%。结论牙周致病菌在全身性促进因素中的遗传因素中可能发挥着一定的作用。【关键词】慢性牙周炎；脐带血；牙周致病菌【】R722【文献标识码】B【】1004-4949(2014)07-0105-01慢性牙周炎是由牙菌斑中的微生物所引起的牙周支持组织的慢性感染性疾病，导致牙周支持组织的炎症和破坏，如牙周袋形成、进行性附着丧失和牙槽骨吸收，最后导致牙齿的松动和被拔除，引起牙周病有局部促进因素（牙石、解剖因素、不良修复体和不良正畸治疗、创伤性颌、食物嵌塞、不良习惯、牙面着色）和全身性促进因素（遗传因素、性激素、吸烟、有关的系统疾病，精神压力等）［1］。致病性微生物是引发牙周病必不可少的始动因素，也在全身性促进因素中的遗传因素中起到主要作用，即母亲患有慢性牙周炎，出生幼儿患有牙周炎的几率较高，主要与母婴传播有关［2］。研究发现原本定植于人类口腔的牙周致病菌在脐带血中有较高的检出率，表明牙周致病菌通过母婴垂直传播导致幼儿将来患有牙周病的几率大大提高。本研究本研究通过收集患有慢性牙周炎产妇脐带血标本,从脐带血标本中提取5种特异性牙周致病菌的DNA,采用特异性引物,通过PCR分别检测牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,Pg)、福赛斯坦纳菌(Tannerellaforsythensis,Tf)、中间普氏菌(Prevotellaintermedia,Pi)、具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum,Fn)以及伴放线放线杆菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans,Aa),来探讨牙周致病菌在牙周病的全身性促进因素中的遗传因素中发挥着一定的作用。1对象和方法1.1研究对象：选择2012年3月至2013年4月在新疆医科大学第一附属医院产科患有慢性牙周炎的产妇64例，所有研究对象均签署知情同意书。慢性牙周炎的诊断标准：每名入选的产妇在术前一周由牙周专科医师测量全口牙周探诊深度(probingdepth,PD)和牙周附着丧失(clinicalattachmentloss,CAL),参照Armitage等［3］推荐的诊断标准诊断牙周炎。1.2标本采集：由产科医师在引产后收集脐带血,将收集的血液放入装有1ml生理盐水溶液的无菌EP管中,-80℃冻存。1.3主要试剂：5%Chelex-100(Sigma公司,美国);蛋白酶K(上海生工生物工程有限公司);2×TapPCRMasterMix(北京博迈德科技发展有限公司);5对牙周致病菌的16SrRNA特异性引物参照文献［4-6］由上海生工生物工程有限公司合成,分别为:牙龈卟啉单胞菌(Pg),上游引物序列5′-TGTAGATGACTGATGGTGAAAACC-3′,下游引物序列5′-ACGTCATCCACACCTTCCTC-3′,扩增的目的片段长度为197bp,PCR反应退火温度57.2℃;福赛斯坦纳菌(Tf),上游引物序列5′-GTCGGACTAATACCTCATAAAACA-3′,下游引物序列5′-TCGCCCATTGACCAATATT-3′,扩增的目的片段长度为222bp,PCR反应退火温度55℃;具核梭杆菌(Fn),上游引物序列5-GGCCACAAGGGGACTGAGACA-3′,下游引物序列5′-TTTAGCCGTCACTTCTTCTGTTGG-3′,扩增的目的片段长度为183bp,PCR反应退火温度58.6℃;中间普氏菌(Pi),上游引物序列5′-GTGCTTGCACATTCTGGACGTCGAC-3′,下游引物序列5′-CGTCTGCAATTCAAGCCCGGGTAAG-3′,扩增的目的片段长度为923bp,PCR反应退火温度61.8℃;伴放线放线杆菌(Aa),上游引物序列5′-GCTAATACCGCGTAGAGTCGT-3′,下游引物序列5′-ATTTCACACCTCACTTAAAGGT-3′,扩增的目的片段长度为442bp,PCR反应退火温度60.7℃。阳性对照采用5种国际参考标准菌株(部分标准株由四...