・970・第17卷第11期2004年11月・论著・医学研究生学报JournalofMedicalPostgraduatesVol.17No.11Nov.2004一氧化氮对体外培养的角质形成细胞血管内皮生长因子表达的影响马慧群,冯捷,张宪旗,田中伟,刘超,邓翠霞(西安交通大学第二医院皮肤科,陕西西安710004)摘要:目的:探讨一氧化氮(NO)对体外培养的角质形成细胞(KC)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:以NO供者S2亚硝酰2N2乙酰青霉胺(SNAP)作用于体外培养的KC,用免疫组化方法检测培养的KCVEGF的表达,用双抗体夹心ELISA法定量检测培养的KC上清液中VEGF的含量。结果:免疫组化染色表明NO可促进体外培养的KC产生VEGF,上清液检测结果亦表明NO可明显增加KCVEGF的分泌,并呈剂量依赖性。结论:NO可能通过对KCVEGF表达的影响而在其生理和病理过程中发挥作用。关键词:一氧化氮;S2亚硝酰2N2乙酰青霉胺;血管内皮生长因子Ξ:R392.11文献标识码:A:100828199(2004)1120970203TheinfluenceofNitricOxideonvascularendothelialgrowthfactorexpressioninculturednormalhumankeratinocytesMAHui2qun,FENG激e,ZHANGXian2qi,TIANZhong2wei,LIUChao,DENGCui2xia(DepartmentofDermatology,theSecondHospitalofXi’an激aotongUniversity.Xi’an710004,Shaanxi,China)Abstract:Objective:ToinvestigatetheinfluenceofNitricOxideontheexpressionofVEGFonker2atinocytesinvitro.Methods:SNAPwereusedasNitricOxidedonortotreatkeratinocytesinvit2ro.TheexpressionofVEGFonculturedkeratinocyteswerestudiedusingimmunohistochemicaltech2nique.CellconditionedmediawasmeasuredusingquantitativeELISA.Results:SNAPupregulatedtheproductionofVEGFbyculturedkeratinocytesatdosedependentmanner.Conclusion:NOmayplayitsroleinpathophysiologicalprocessesbyinducingtheexpressionofVEGFonkeratinocytes.Keywords:NitricOxide;SNAP;VEGF0引言一氧化氮(NO)是一种多效性生物气体分子,由一氧化氮合酶催化L2精氨酸和氧分子合成。NO在皮肤组织的生理和病理过程中均具有重要作用1,2。血管内皮生长因子(VEGF)也称血管通透---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---因子,是一个多功能细胞素,既是强烈的内皮细胞有丝分裂原,又是促血管生长因子,调节生理性和病理性血管生成3。角质形成细胞(KC)是皮肤中VEGF的主要4。我们以KCVEGF分泌的强α(TGF2α)为对照,研究了NO诱导剂转化生长因子2供者S2亚硝酰2N2乙酰青霉胺(SNAP)对KCVEGF产生的影响,以探索NO在皮肤组织生理和病理过程中的作用机制。结果报道如下。Ξ收稿日期:2004208210;修订日期:2004209217基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号:30200247)作者简介:马慧群(19672),女,陕西乾县人,助理研究员,医学博士,主要从事色素性皮肤病及红斑鳞屑性皮肤病的研究。第11期马慧群,等一氧化氮对体外培养的角质形成细胞血管内皮生长因子表达的影响・971・1材料和方法1.1材料SNAP(购自美国GIBCOBRL公司)用甲醇溶解,实验时用培养液配成所需浓度。TGF2α、人VEGF定量ELISA试剂盒购自深圳晶美生物公司。兔抗人VEGF多克隆抗体为美国SantaCruz公司产品,免疫组化ABC试剂盒购自华美生物公司。1.2细胞培养正常人KC体外培养按参考文献5的方法进行,由包皮环切术切除的正常成人包皮分离获取KC,培养于KC无血清培养液(购自GIB2COBRL公司),内含0.09mmol/LCa2+、牛垂体提取物(BPE)20μg/L、重组表皮生长因子(EGF)0.2g/L,在5%CO2,37℃恒温培养箱中培养。实验用第2～5代KC。1.3免疫组化当培养细胞融合达75%～85%时,胰酶消化,接种于预先放置玻片的6孔培养板,每孔1×105细胞,加入2ml培养液,细胞长至80%融合时,换用KC基础培养液(KBM)(不加BPE和EGF),加入不同浓度SNAP和(或)TGF2α(100g/L),每孔均设3个复孔,培养24h后用4%多聚甲醛固定,免疫组化染色5,阴性对照用PBS代替一抗。细胞质棕黄着色为阳性。采用德国HPIAS—1000高清晰度彩色图文分析计算机系统对阳性染色结果进行半定量测定。1.4ELISA法检测VEGF细胞长至75%～85%融合时,胰酶消化,接种于24孔培养板,每孔1×105细胞,每孔加入1ml培养液,16h后组织...