PDGFR-P在子痴前期患者胎盘中的表达及其意义谢育娣（厦门大学附属第一医院妇产科福建厦门361003）【中图分类号】R714.24+5【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）48-0020-03【摘要】目的探讨血小板源生K:因子受体beta（Plateletderivedgrowthfactorreceptorbeta,PDGFR-?庇子痫前期胎盘中的表达及其意义。方法采用RT-PCR方法研究40例子痫前期和25例正常妊娠胎盘组织中PDGFR-?mRNA的表达;采用免疫组织化学法研究40例子痫前期和25例正常妊娠胎盘组织中PDGFR-?蛋白的表达及定位。结果子痫前期患者PDGFR-?mRNA及蛋白表达均显著高于正常妊娠组（P<0.05）o结论子痫前期组胎盘组织PDGFR-?的mRNA、蛋白高表达，PDGFR-?主要表达于绒毛毛细血管内皮，引起胎盘血管的动脉粥样硬化改变（AS）,参与子痫前期的病理生理过程。【关键词】子痫前期胎盘PDGFR-?RT-PCRAS子痫前期是妊娠期常见病，主要病理变化是全身小动脉痉挛，可能导致全身多器官、多系统受损，胎儿宫内发育迟缓、死胎等不良后果，是围产期母婴死亡的主要原因之一。但其病因尚未明确。近年来研究发现PDGFR过量表达，与血中的血小板源生长因子结合产生生物学效应，导致胎盘及全身血管内皮功能失调，产生高血压、蛋白尿等临床表现［1-2］。木文检测了PDGFR-?在子痫前期患者胎盘组织中的表达，以探讨其在子痫前期中的作用和临床意义。1资料与方法1.1研究对象和分组：选择2008年10月至2009年6月于厦门大学附属第一医院剖宫娩的轻、重度子痫前期患者各20例。诊断标准参见《妇产科学》第6版［3］。另选取年龄和孕周匹配的正常孕妇25例作为对照组。所有病例均除外其它内外科合并症。病例组和对照组孕妇年龄和孕周差异无统计学意义（采用成组t---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---检验，t值分别为1.365和1.384,P均>0.05,见表1）。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1.2标本采集和处理：两组孕妇分娩后立即取其胎盘母体面(脐带附着处对侧)绒毛膜板下绒毛组织约lOOmg,用冰生理盐水冲洗血液后立即放入液氮,转移至实验室后贮存于-80&deg;C超低温冰箱待行RT-PCR检测。另于该部位处避开梗死和餌化区取胎盘组织约1.0cm&times;1.0cm&times;0.5cm人小，立即置于10%福尔马林固定24h，包埋，制作蜡块，待行免疫组化及病理检查。1.3实验方法RT-PCR检测胎盘组织中PDGFR-?mRNA的表达(1)采用Trizol一步法抽提RNA(试剂购自Invitrogen公司)，RNA浓度和纯度经核酸分析仪分析，A260/A280在1.7〜2.1之间。(2)按逆转录试剂盒(购自Promega公司)操作步骤吸取2&mu;g总RNA进行逆转录。(3)PCR反应：引物序列.•PCR反应体系(25&mu;l):cDNA0.25&mu;g,MgCI21.5mmol/L,1.0&times;Buffer和dNTP各200&mu;mol/L,Taq酶1.0U/25&mu;LPDGFR-?和GAPDH上下游引物分别为0.2&mu;mol八、0.1&mu;mol/L,加去离子水至25&mu;l。反应条件：94°C变性30s,59°C退火45s,72°C延伸60s,35个循环，终末延伸10分钟。引物及PCR反应试剂由上海生物工程公司合成；(4)取PCR产物5&mu;l电泳、ImageMasterVDS-CL凝胶成像系统扫描，PDGFR-?和GAPDH的电泳条带灰度积分比值表示PDGFR-?的相对表达含量。1.3.2免疫组化法测定胎盘组织中PDGFR-&beta;的表达及定位免疫组化S-P法进行测定，一抗为兔抗人PDGFR-&beta;多克隆抗体，一抗---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---稀释度为1:100;二抗为鼠抗兔IgG。将蜡块进行切片、按试剂盒说明进行操作。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---结果评价标准：光镜(&times;100)下观察，细胞膜或(和)细胞质中有棕黄色颗粒为阳性染色。每张切片随机选取高倍(&times;100)视野10个，用高清晰彩色病理图像分析系统(HPIAS-100)测定切片图像的阳性反应平均灰度值，即滴加上述一抗后的每张阳性染色切片图像平均灰度值(包括绒毛组成区域背景区)与阴性对照切片图像的平均灰度值的差值。结果以平均灰度值&plusmn;标准差表示。1.4胎盘组织病理学检查：将蜡块切片，行HE染色后于光学显微镜下观察，比较对照组和子痫前期患...