红花籽粕降糖有效部位的纯化工艺[摘要]目的研究以大孔吸附树脂纯化的方法制备红花籽粕降糖有效部位的最佳工艺。方法以静态吸附法考查11种大孔树脂对有效部位的吸附和解吸附性能，以纯化后有效部位产率和酶活性数据进行综合评分，选出纯化效果最佳的树脂进行下一步动态筛选研究，并确定最佳纯化工艺。结果经过静态吸附-解吸附实验筛选出AB-8型大孔树脂为最佳纯化树脂；动态筛选结果得出最佳纯化工艺为：上样药液质量浓度为75mg/mL；上样量为6BV；吸附速率为3BV/h。洗脱前先用水洗至还原糖阴性反应，再分别用10%、70%、95%乙醇以3BV/h的速度洗脱，收集10%乙醇洗脱液6BV和95%乙醇洗脱液5BV，合并洗脱液，干燥后即获得有效部位。结论经AB-8型大孔树脂纯化处理后的红花籽粕有效部位降糖活性明显提高。此方法简便易行、成本低，可以用于工业化生产红花籽粕降糖有效部位。[关键词]红花籽粕；大孔树脂；纯化；降糖作用[]R93[文献标识码]A[]1673-7210（2016）07（c）-0016-05红花籽，中药称“白平子”，是红花（CarthamustinctoriusL.）的种子。红花籽粕（Safflowermeal）是红花籽提取红花籽油后的副产品[1-2]。目前，红花在国外主要分布在印度、美国、加拿大、欧洲等30多个国家[3]。我国红花主要分布于新疆、河南、四川、河北、浙江等省[4-5]，主要用作中药和油料作物，红花籽榨油后的籽粕部分无毒、无异味，含18种氨基酸，是一种较优质的蛋白质，并在很多国家和地区多作为牲畜的饲料或有机肥料[6-9]。红花籽粕中也含有许多天然抗氧化物质，目前对红花籽粕的研究大部分是针对其中的5-羟色胺及其衍生物，包括富集、分离、纯化、抗氧化性和清除自由基、调节机体内的免疫反应、抑制肿瘤和消炎抑菌、保护机体中的NK细胞免受程序性死亡及强烈抑制黑色素生成等生物活性的研究[10-14]。前期工作中已获得了红花籽粕的提取物，发现了它具有蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP-1B）抑制能力[15]。本研究通过对比11种不同类型的大孔树脂的静态吸附-解吸附能力、产率，对PTP-1B和α-葡萄糖苷酶的抑制活性，筛选出最佳的树脂，并以提取物对PTP-1B和α-葡萄糖苷酶的抑制活性以及产率为指导，对其进行优化，确定最佳纯化工艺，为工业化生产提供了方法。1仪器与材料1.1仪器旋蒸发仪（BuchiR-210型，瑞士产）；电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司，DHG-9070A型）；全温震荡培养箱（上海市实验仪器总厂，HZQ-F160型）；M-5酶标仪（美国分子仪器公司）；1.2大孔树脂类型HPD100、HPD300、HPD450、HPD500、HPD600、HPD750、AB-8、X-5、D101、NKA-9、ADS-17型大孔树脂（沧州宝恩化工有限公司）。1.3试药实验材料购自新疆塔城，由中国科学院新疆生态与地理研究所标本馆冯缨研究员鉴定为红花种子。对硝基苯磷酸二钠盐（pNPP）、矾酸钠，α-葡萄糖苷酶、阿卡波糖、4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）和二甲基亚砜（DMSO）均为由美国Sigma公司提供，石油醚和乙醇（食用乙醇）由天津市百世化工有限公司提供，水为纯化水。2方法与结果2.1红花籽粕提取液的制备称取榨油后，粉碎的红花籽粕4.2kg，按1∶8的固液比，进行石油醚渗漉、脱脂，脱脂后的药材粉末晾干后，在80℃的条件下用70%乙醇加热回流提取3次，每次1h，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，且浓缩药液相对密度为1.06g/mL，放入4℃冰箱保存。2.2大孔树脂的筛选2.2.1树脂处理根据文献[16-17]的方法，将11种大孔树脂用95%乙醇浸泡2～4h，排出乙醇后，反复用蒸馏水冲洗至树脂在试管中加入3倍量水不显浑浊为止，然后用超净水充分淋洗至无乙醇气味，抽滤。分别称取11种已处理好的大孔树脂2g放入锥形瓶中，加入稀释的红花籽粕提取液（样品浓度P0为29.2286mg/mL）30mL。摇床振摇（180r/min，25℃）2h。过滤，滤出液烘干至恒重，计算流出液浓度Pe。过滤后的大孔树脂水洗抽干，加95%乙醇30mL，置摇床（180r/min，25℃）振摇2h，静置2h进行静态解吸附。解吸附液过滤烘干至恒重，计算解析液浓度Pd。V0为上样体积，M为树脂重量。分别按下式计算吸附量、吸附率、解吸率：吸附量（mg/g，湿树脂）=（P0-Pe）×V0/M，吸附率（%）=（P0-Pe）×100/P0，解吸率（%）=Pd×100/（P0-Pe...