500L生物反应器生产人二倍体细胞狂犬病疫苗工艺的研究赵志鹏［摘要］目的通过500L生物反应器培养人二倍体细胞，接种感染PM株狩犬病毒，监测人二倍体细胞生长情况和病毒表达情况，确定一套可行的疫苗生产放大工艺。方法采用一定细胞传代接种比例培养人二倍体细胞、同时按照一定的病毒接种比例感染细胞，监测细胞病毒培养过程中的细胞密度及病毒表达情况，从而确定生产工艺的可行性。结果经过50L和500L生物反应器培养MRC-5细胞，接种感染狂犬病毒PM株毒种后，细胞生长良好，细胞密度、病毒滴度表达水平及表达持续时间均能达到疫苗生产要求。结论用500L生物反应器培养MRC-5细胞，生产人二倍体细胞狂犬病疫苗，该生产放大工艺是可行的。［关键词］生物反应器；人二倍体细胞；狂犬病疫苗；病毒表达；生产工艺［中图分类号］R186【文献标识码］A［文章绢号］1006-172X（2017）01-034-04ManufactureofHumanDiploidCellRabiesVaccineUsing500LBioreactorsZHAOZhipengChengduKanghuaBiologicalProductsCo.,LTD,Chengdu610041,SichuanProvince,China.AbstractObjectiveToinfecthumandiploidcellsincubatedin500LbioreactorswithPMstrainofrabiesvirusandmonitordiploidcellgrowthandvirusexpressionsoastodevelopafeasiblevaccineproductionscale-upprocess.MethodsHumandiploidcellswereincubatedin500Lbioreactorsataspecifiedpassageratioandtheninfectedataspecifiedvirusinoculationratio；diploiddensityandvirusexpressionduringincubationweremonitoredsoastodeterminefeasibilityofthemanufacturingprocess.ResultsFollowinginoculationofPMstrainofrabiesvirustoMRC-5cellsincubatedin50Land500Lbioreactors,thecellsgrewwell；celldensi-ty,virustiterexpressionlevelanddurationcouldallmeetvaccinemanufacturerequirements.ConclusionTheproductionscale一upprocessofincubatingMRC-5cellsusing500Lbioreactorstomanufacturediploidcellrabiesvaccineisfeasible.Keywordsbioreactor；humandiploidcells；rabiesvaccine；virusexpress；manufacturingprocess狂犬病又称“恐水病”、“疯狗病”，是人被带犬病毒的病兽（犬、猫、狼、狐狸）咬伤后由狂犬病毒感染引起的一种烈性传染病。该病目前无有效治疗方法，一旦发病，死亡率为100%被列为中国的一类传染病。一旦暴露，有效的方法就是接种狂犬病疫苗并注射狂犬病免疫球蛋白。狂犬病人二倍体作者单位：成都康华生物制品有限公司（成都610000）作者简介：赵志鹏（1982-）,男,本科，工程师，疫苗生产与研发，E-mail:zzp@kangh.com疫苗是美国维斯塔研究所首创⑴，具有较好的安全性和免疫原性，被公认为金标准疫苗）。目前，国内大部分疫苗企业仍采用传统的转瓶培养细胞的工艺来制备细胞生产病毒疫苗，该方法具有培养细胞密度低、病毒滴度低、劳动强度大等缺点⑴。20世纪70年代，建立了微载体生物反应器培养动物细胞的工艺⑷，把贴壁培养和悬浮培养两种培养工艺融合在一起，兼有两者的优点，使得动物细胞工业化的大规模、高密度培养，以满足生物技术发展的需要，而细胞微载体放大培养就是其中的关键技术之一°F。本研究通过500L生物反应器培养人二倍体细胞MRC-5,接种感染PM株狂犬病毒，观察人二倍体细胞生长情况和病毒表达情况，确定了一套大规模的生物反应器培养人二倍体细胞的生产工.艺。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞株和毒株MRC-5细胞，用于培养PM株狂犬病毒；BHK21细胞，用于病毒滴度检测；TE犬病毒PM株，用于狂犬病疫苗试制。以上细胞，毒株均由成都康华生物制品有限公司□行保存、制备。1.1.2主要试剂MEM培养基（日水制药株式会社）；小牛血清（天杭生物）；细胞生长液（口制，小牛血清，MEM等）；病毒维持液（自制，人血白蛋白，MEM---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---【论著】等）；甲基纤维素（G1BCO）；pH7.20.01mol/L的PBS（自制）；细胞消化液（主要含胰蛋白醯等）；狂犬病抗原检定试剂盒（宁波天润生物药业有限公司）1.1.3主要设备50L生物反应器和500L生物反应器（广州...