传染病检测技术在血液筛查中应用的现状北京市红十字血液中心邱艳一、血液筛查的发展历史（PPT1）从血液筛查的发展历史可以看到，在二十世纪60年代，输血传染病高达25%。1970年发现了乙肝表面抗原，然后对其进行检测，输血后的感染率降到10%。1980年检测艾滋病病毒后，输血感染率继续下降，随后检查抗核抗体、丙肝等，输血感染率降到很低。（PPT2）显示的是输血传染病的检测方法，1970年采用颗粒凝集法，1980年采用ELISA酶联免疫法，1990年采用化学发光法，目前多采用核酸法。目前，输血感染率的残余风险逐渐降低，2001年达到百万分之几的概率。二、HIV感染诊断（一）HIV感染诊断实验的种类1.抗体检测实验间接酶联法测抗体,直接(双抗原夹心)法测抗体,快速诊断法检测抗体抗体确认试剂,其他抗体检测试剂。2.抗原检测实验：主要是检测P24抗原。3.抗原和抗体联合检测实验：与ELISA抗体检测兼容性良好，成本低。4.核酸检测实验：核酸定性和定量检测实验。（二）HIV检测的标记物PPT6显示的是HIV的不同标志物。HIV感染后的10天以内是窗口期，不能检测出病毒。约5天后会出现P24抗原，即病毒核酸RNA复制，随后机体的免疫系统对其进行识别，会产生IgG、IgM。四十天后，会出现IgG抗体。这些标志物中，只有IgG抗体是稳定的。（三）HIV抗体检测方法1.酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA）ELISA最早用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原，IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测。2.抗体确证实验3.其他类抗体检测试验（四）抗-HIVEIA检测试剂的发展第一代是HIV-1病毒裂解产物，检测类型是IgG类抗体。第二代是HIV-1+2人工合成肽，检测类型是IgG类抗体。第三代是HIV-1+2基因重组，利用双抗原加锌法，检测IgG、IgM抗体，把窗口期缩短到三周。第四代是HIV-1+2基因重组，利用双抗原加锌法，检测IgG、IgM抗体与抗原，把窗口期缩短到两周。现在又加入核酸，可以缩短到一周之内，越来越安全。（五）确证试验初筛HIV阳性的，利用确证试验来确认。确证试剂：蛋白印迹法（WesternBlot，WB）类确证试剂：抗原多为全病毒裂解抗原，用聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳将HIV蛋白按其分子大小进行分离，将凝胶中的不同HIV蛋白条带电泳转移至硝酸纤维薄膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶标抗体染色，检测针对不同结构蛋白抗体。这类试剂的抗原条带全，包括control带，膜区抗原gp160、gp120和gp41，核心抗原p55、p24和p17，聚合酶抗原p66、p51、p39和p31，还有HIV-2型特异性抗原，特异性较高。喷膜类确证试剂：主要采用基因工程表达的抗原，其抗原条带没有全病毒裂解抗原全，但包含有主要的抗原条带，如LiaTek®HIV-III确证试剂包含HIV-1型env区gp120和gp41,gag区p24和p17，pol区p31,HIV-2型env区的gp105和gp36。（六）其它HIV抗体类检测1.胶体金类快速检测近几年开发了以胶体金或硒为标记物、以硝酸纤维素膜为载体、以层析形式进行固相免疫测定的技术，利用该技术制备了HIV抗体快速诊断试剂，该试剂稳定，可以在室温条件下保存一年或更长。操作简单而快速，数分钟即可得出结论，不需仪器设备，尤其适于单份测定等。但其灵敏度偏低。2.唾液HIV抗体检测3.乳胶颗粒检测4.尿液HIV抗体检测（七）HIV核酸检测1.HIV核酸定性检测：主要用于窗口期的早期诊断以及献血者的筛选。2.HIV核酸定量检测3.HIV核酸诊断试剂的种类有雅培的、贝尔的、罗氏的试剂。三、抗-HCV检测抗HCV检测主要用于献血源筛查以及实验室诊断。（一）HCV抗体筛查中的抗原决定簇PPT18是HCV的结构基因。有核心区、包膜区，包膜区有一区、二区，非结构区NS2、3、4、5，然后这些区都会刺激机体产生抗体。第一代抗体只是针对细胞膜区来设计的。第二代抗体加大了NS3的检测。第三代抗体加入了NS3、NS4、NS5及核心区的检测。第四代增加了抗原的检测。（二）RIBA®HCV3.01.用于筛查实验阳性（RR）样品的HCV抗体确认。是为与高灵敏度的ORTHOHCV3.0ELISA试剂相匹配而研发的确认试剂。2.可辅助生化检测结果用于肝炎诊断。3.独特的IgG（I/II）及hSOD内部质控设计。4.用于检测的固相化抗原：重组表达蛋白：c33c、NS5；合成肽抗原：c100p（5-1-1p）、...