丹龙醒脑片对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马区肿瘤坏死因子α表达和细胞凋亡的影响作者：何倩,周小青,李花,刘旺华,刘建新【摘要】目的探讨丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注后海马区神经细胞凋亡和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,探讨其作用机制。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用原位末端标记法和免疫组化法分别检测假手术组、模型组、丹龙醒脑片组和尼莫地平组的凋亡细胞数和TNF-α阳性细胞数。结果与假手术组相比,模型组凋亡细胞数和TNF-α表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01)；与模型组相比,丹龙醒脑片组凋亡细胞数和TNF-α表达明显降低(P＜0.05)。结论TNF-α表达下降可能是丹龙醒脑片减少大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的分子机制之一。【关键词】脑缺血再灌注；丹龙醒脑片；细胞凋亡；肿瘤坏死因子α；大鼠Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofDanlongXingnaoTabletonneuronalapoptosisandexpressionofTNF-αafterfocalcerebralischemiareperfusioninrathippocampus.MethodsThemodelofmiddlecerebralarteriesocclusion(MCAO)wereperformedwithintraluminalfilamentblockade.Byusinginsituterminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTP-biotornickendlabeling(TUNEL)andimmunohistochemistrystaining,thenumberofapoptoticcellsandTNF-αpositivecellsweredetectedinthesham-operatedgroup,theischemiareperfusiongroup,DanlongXingnaoTabletgroupandnimodipinegroupafterthemiddlecerebralarteriesofSDratsoccludedfor1handreperfusedfor24h．ResultsComparedwiththeshamoperationgroup,thenumberofapoptoticcellsandTNF-αpositivecellsofthemodelgroupincreasedsignificantly(P＜0.05,P＜0.01).Comparedwiththemodelgroup,DLXNTintragastricadministrationcouldreducethenumberofapoptoticcellsandTNF-αpositivecells(P＜0.05).ConclusionThedecreasedexpressionofTNF-αmaybeoneofthemolecularmechanismsofdecreasedapoptoticcellafterratcerebralischemiareperfusioninjuryingtreatedwithDanlongXingnaoTablet．Keywords：cerebralischemiareperfusion；DanlongXingnaoTablet；apoptosis；TNF-α；rat丹龙醒脑片是临床治疗缺血性卒中的有效复方。以往的研究证实,丹龙醒脑---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---片具有增加脑组织局部血流量、抗神经细胞凋亡等作用[1-3]。在局灶性脑缺血再灌注后存在大量的神经细胞凋亡,尤其在缺血半暗带区及对缺血较为敏感的海马区。肿瘤坏死因子α(TNF-α)是凋亡诱导家族的重要成员之一,本实验选用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察丹龙醒脑片对脑缺血再灌注后海马区TNF-α蛋白表达的影响,探讨丹龙醒脑片抗局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡、减轻病理性损伤的机制。1实验材料1.1动物清洁级SD大鼠72只,雌雄各半,体重280～300g,中南大学湘雅医学院动物学部提供,合格证号：医动字第20-010号。1.2药物丹龙醒脑片由丹参10g、三七6g、地龙6g、远志8g、淫羊藿8g、菟丝子8g组成,原药材购自湖南中医药大学附属第一医院药房,湖南中医药大学药学院药剂教研室制成片剂,批号070615。0.4g/片,每片含原药材4g。用时研细,加蒸馏水配成所需浓度混悬液。尼莫地平由正大青春宝药业有限公司生产,批号070825,每片20mg,临用前将胶囊去壳,内容物用蒸馏水配成混悬液,按人鼠体表面积换算,1mL/100g体重灌胃给药,剂量为10.8mg/kg。1.3主要试剂和仪器多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)为武汉博士德生物有限公司提供,批号06052109。水合氯醛购自白鹤化工厂,批号20060924。单尼龙线(直径0.26mm)为市售,使用前剪成5cm长的线段,筛选出前端光滑、钝圆、大小一致者,于2cm处作好标记,前段3cm浸入0.1%Poly-L-Lysine(w/v),5min自然晾干,临用前在前端蘸取肝素。马头牌GPS型双极电凝器(上海医用激光仪器厂生产)；彩色图像分析系统(Optimas,美国)。2实验方法2.1分组及给药大鼠按性别、体重分层,随机分为4组,即假手术组、模型组、丹龙醒脑片组、尼莫地平组,每组各18只大鼠,雌雄各半。灌胃给药,灌胃体积为1mL/100g体重,从手术前...