不同剂量放射线对大鼠涎腺Rad50表达的影响摘要：目的：研究不同剂量放射线对大鼠涎腺Rad50表达的影响。方法：将36只雄性Wistar大鼠，随机分成6组：分为对照组（未放射），实验组为3Gy组、6Gy组、9Gy组、12Gy组、15Gy组。实验组用Co60一次性放射后，2h内处死大鼠。免疫组织化学法了解Rad50在大鼠腮腺、颌下腺表达水平和定位。结果：Rad50在大鼠腮腺中主要表达于导管系统和浆液性腺泡，在颌下腺浆液性腺泡中也有表达，在导管和黏液性腺泡中弱表达。大鼠浆液性腺泡中15Gy组与对照组相比表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05），其余各放射组与对照组涎腺组织中的Rad50表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：Rad50表达水平和定位在大鼠腮腺和颌下腺中有些差异，可能参与了涎腺放射敏感性的机制。关键词：Rad50；放射；腮腺；颌下腺国外研究报道，Rad50是一种维持染色体结构稳定的相关蛋白，是组成MRN（Mre11-RAD50-Nbs1complex）复合体3个亚单位的其中一个蛋白，在组织细胞放射性损伤DNA修复过程中有至关重要的作用[1]。目前认为，鼻咽癌放射治疗中的放射线可导致涎腺组织损伤，但不同剂量放射线对大鼠涎腺Rad50表达的影响，以及在不同腺泡及导管的表达是否有差异性，尚未见报道。研究采用免疫组织化学法，检测Rad50在大鼠腮腺、颌下腺表达水平和定位，研究其在涎腺损伤修复过程中的意义。1资料与方法1.1一般资料：选用质量为250～300g健康雄性Wistar大鼠36只（购自广西医科大学医学动物实验中心）。随机分为对照组、3Gy组、6Gy组、9Gy组、12Gy组、15Gy组，每组各6只。以Co60γ射线为放射源，头颈部为放射野，其他部位受铅块保护，10mm厚铅块保护周围组织，皮源距为80cm，照射中心在皮下0.5cm，采用分割照射，模拟人体照射的方法。待大鼠麻醉后照射，麻醉时以每公斤体重水合氯醛350mg为标准进行腹腔注射，麻醉后按组别分别照射大鼠的放射野，每个组一次达到所需剂量照射。每次放疗完成后2h内处死大鼠，取腮腺、颌下腺组织标本待查。1.2仪器、试剂与实验方法：Co60放射治疗机780C（加拿大）；倒置相差显微镜CX41（Olympus，日本）；Rad50兔抗鼠多克隆抗体购于美国sigma公司；免疫组化SABC试剂盒购于武汉博士德公司，其他试剂均为进口分装或国产分析纯。操作方法按说明书进行，于400倍镜下随机选取5个不连续视野，运用Ipp6.0的平均光密度值meanopticaldensity=IODSUM/areaSUM对各组图片进行半定量分析，对比分析Rad50在大鼠腮腺、颌下腺表达水平和定位。1.3统计学分析：采用SPSS13.0统计软件包进行数据处理，实验数据以均数±标准差（）表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用Student-Newman-Keuls检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。2结果---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---显微镜下显示大鼠腮腺由浆液性腺泡及导管系统构成，颌下腺由浆液性腺泡、黏液性腺泡及导管系统构成。免疫组化在放射组与对照组中，阳性染色主要在细胞胞质，为棕褐色或者棕黄色，Rad50在大鼠腮腺中主要表达于导管系统和浆液性腺泡；在颌下腺浆液性腺泡中也有表达，在导管和黏液性腺泡中弱表达。见图1。大鼠浆液性腺泡中15Gy组与对照组相比表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05），其余各放射组与对照组涎腺组织中的Rad50表达两两比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。Rad50蛋白图像半定量分析结果见表1。图1ARad50在大鼠腮腺中的阳性表达。（免疫组织化学染色法×400）BRad50在大鼠额下腺中的阳性表达。（免疫组织化学染色法×400）表1各组中腮腺颌下腺Rad50蛋白的表达（）注：与对照组比较，①P＜0.053讨论放疗是头颈部肿瘤的主要治疗方法之一，放射治疗剂量常规在70Gy以内，到达高剂量时会导致唾液腺的损伤，发生严重口干症，影响了患者的生存质量[2]。本实验中之所以选择3～15Gy的剂量，是因为大鼠有可能在逐量放射3Gy到达15Gy，至15Gy时会导致大鼠涎腺组织的损伤。Rad50、Mre11和Nbs1组成MRN（Mre11-RAD50-Nbs1complex）复合体，Rad50是其中一个组成蛋白，它们共同发挥着维持染色体结构稳定的作用。Rad50结构中含有ATP绑定盒的ATP酶（ATP-bindingcas...