血小板活化因子对培养人脐静脉血管内皮细胞损伤作用的探讨*［摘要］目的：观察在培养条件下血小板活化因子(PAF）能否直接损伤原代人血管内皮细胞（HVEC）和ECV-304细胞系。方法：利用光镜和结晶紫比色的方法，观察HVEC、ECV-304细胞系与PAF孵育前后形态和生物活性变化。结果：PAF与HVEC孵育30min即发生细胞形态改变，生物活性则未见显著下降，与ECV-304细胞系孵育后的细胞形态和生物活性未见明显变化。结论：在培养条件下PAF可致HVEC损伤，对ECV-304细胞系则未见明显损伤。［主题词］血小板活化因子；内皮，血管［中分类号］R331.3+2［文献标识码］A［］1000-4718(2000)07-0609-02［MeSH］Plateletactivatingfactor;Endothelium,vascular血小板活化因子（platelet-activatingfactor，PAF）是目前已知的强促炎因子，具有多种生物学效应，可诱导血小板聚集，引发白细胞粘附，使毛细血管通透性增强，导致缺氧心肌再灌注损伤，在动脉粥样硬化的发生、心肌缺血再灌注损伤、炎症、移植排斥反应等过程中有重要作用［1，2］。本文利用体外培养技术，研究PAF对人脐静脉血管内皮细胞（humanumbilicalveinvascularendothelialcell,HVEC）和血管内皮细胞系ECV-304是否有直接损伤作用。材料和方法一、材料PAF（1-o-octadecyl-2(R)-acetyl-glycero-3-phosphocholine）,购自Sigma公司，用前以含0.25%BSA-Hanks液稀释；M199培养基、DMEM培养基,购自Gibco公司；0.1%I型胶原酶，购自Sigma公司；银杏总内酯（Ginkolide，其中含：GinkolideA39.6%，GinkolideB39.9%，GinkolideC2.0%），由南京药科大学娄凤昌教授提供，用前以含0.25%BSA-Hanks液稀释。二、方法（一）HVEC的分离与培养取新生儿脐带20～40cm，用生理盐水冲净残存血液，以0.1%胶原酶37℃消化15min，收集消化液，1000r/min离心10min，D-Hanks液洗2次，M199、15%胎牛血清、青霉素和链霉素液调细胞数至1×106个/mL，加到24孔培养板，100μL/孔（1×105个细胞/孔），37℃、5%CO2培养3～5d使细胞长成单层贴壁细胞。第一批实验将细胞分为HVEC+PAF（不同浓度）、0.25%BSA-Hanks和Triton-100（0.05%）共3组，观察细胞形态和活性；第二批实验将细胞分为HVEC+PAF（不同浓度）、HVEC+Ginkolide（10mg/L）、HVEC+Ginkolide（10mg/L）+PAF（不同浓度）、0.25%BSA-Hanks共4组，观察细胞形态和活性。（二）传代EC的培养细胞系ECV-304由中国医学科学院基础医学研究所细胞室馈赠，用含10%胎牛血清的DMEM培养，其它条件同上。（三）细胞形态观察用倒置显微镜观察细胞形态和整体排列分布情况。（四）细胞活性观察根据文献［3］的方法，用0.25%结晶紫染色，在570nm测定光密度值。（五）统计方法数据用±s表示，统计先用ANOVA，然后用Q检验进行两组间差异显著性检验，利用SPSS6.0软件包进行统计。结果一、HVEC的形态和活性变化HVEC与PAF孵育30min后，形态由长梭状或多边形变为椭圆或圆形，细胞间隙加大，由紧密排列变为疏松的单个细胞，但每次实验所需PAF的浓度不同,在10-12～10-6mol/L之间，生物活性与正常对照相比无显著差异（P＞0.05），见表1。表1PAF对HVEC生物活性的影响Tab1EffectofPAFonbioactivityofHVEC（±s）GroupnOD0.25%BSA-Hanks120.72±0.380.05%Triton120.35±0.15*PAF(10-6mol/L)120.58±0.32*P＜0.05，vs0.25%BSA-HanksHVEC与Ginkolide（10mg/L）先孵育5min后，再加入PAF孵育1h，细胞形态及排列未见明显变化，其结晶紫染色OD值与0.25%BSA-Hanks组相近，PAF、Ginkolide与HVEC孵育后活性染色OD值分别与0.25%BSA-Hanks组无明显差异,见表2。表2PAF与Ginkolide对HVEC生物活性的影响Tab2EffectofPAFandGinkolideonbioactivityofHVEC（±s）GroupnOD0.25%BSA-Hanks80.54±0.17PAF(10-6mol/L)80.40±0.19Ginkolide(10mg/L)80.54±0.22Ginkolide(10mg/L)+PAF(10-6mol/L)80.54±0.30二、ECV-304的形态和活性变化ECV-304细胞系与PAF（10-6mol/L）孵育1h后，其结晶紫染色OD值未见明显变化；孵育2h后，细胞形态及分布排列未见明显变化。讨论PAF是目前已知的强促炎因子，可以引发血小板聚集，白细胞粘附性增加，Bussolino等报道［2］，PAF可使培养的HVEC收缩...