超高速液相色谱-串联质谱联用法检测食品中灭蝇胺残留量周洪伟(广州市疾病预防控制中心理化科510440)【摘要】目的：建立超高速液相色谱-串联质谱联用法检测食品中灭蝇胺残留量的方法。方法：样品匀浆后经乙月青水提取酸化后经以C18固相萃取柱净化,应用超高速液相色谱■电喷雾串联四极杆质谱仪多离子反应监测(MRM)定量法检测。结果：经方法学确认，该方法对灭蝇胺的检出限为1.0ug/kg,定量限为l.Oug/kgo在5.0〜200.0的线性范围内，相关系数r>0.9999,回收率78.2%〜95.6。结论：方法灵敏度高、定量准确、测定浓度范围广，是食品中灭蝇胺含量检测的理想方法。【关键词】超高速液相色谱■■串联质谱联用法多离子反应监测(MRM)固相萃取灭蝇胺【中图分类号】R155.5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)35-0103-02灭蝇胺(Cyrovmaziane)是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，是强内吸性昆虫牛长调节剂。主要用于防治菜豆、叶菜类和瓜类的美洲斑潜蝇和潜叶蝇等农业害虫。是我国农业部推荐的无公害农药。为了保证食用安全，我国已制定了其在农产品中的残留限量是0.2mg/kg,由于灭蝇胺可以添加到动物饲料中用于控制畜禽养殖场苍蝇的牛长发育，农业部将灭蝇胺批准为三类新兽药。许多养殖户没有严格按照休药期的规定，会造成鸡蛋和肉等动物产品中的药物残留［1］。现有的灭蝇胺检测方法多釆用气相色谱■质谱法［2］和高效液相色谱法(HPLC)［3・4］由于灭蝇胺属于极性化合物，需衍牛才能气化，因此釆用GC-MS检测时过程较为繁琐：HPLC法易受杂质干扰且灵敏度较低。木研究建立检测食品中灭蝇胺残留量的超高速液相色谱■串联质谱联用法，其中食品包括谷物、水果、蔬菜及禽肉、内脏、奶、蛋等不同种类样品。1材料与方法1.1仪器与试剂Acuqity-TOQ超高效液相色谱■串联质谱仪（UPLGMS/MS）,AcquiltyUPLCBEHC18色谱柱（Waters公司），灭蝇胺标准品（纯度99.0%,德国Dr.EhrenstoferGmbh公司）。乙腊（色谱纯，Merck公司），氨水、盐酸（分析纯，广州化学试剂厂），AccuBONDIIODS-C18Cartridges500mg6ml（Agilent公司）。1.2标准物质溶液的配制准确称取灭蝇胺标准品0.0匹（精确到O.OOOlg）,用色谱纯乙腊溶解并定容至100ml,配成浓度为100mg/L的标准储备液，吸取标准储备液1.0ml,用色谱纯乙腊溶解并定容至100讨配成浓度为lmg/L的中间储备液。上述标准溶液储存于冰箱（0〜4°C）中。使用时用流动相稀释储备液制备标准工作溶液，用于绘制和校准曲线。1.33样品的前处理将样品切碎，充分混匀，放入组织捣碎机中捣碎成匀浆，准确称取20g（精确到O.Olg）,置于100ml聚乙烯具塞离心管中，加入30ml水■乙腊（1：9）溶液,超声30分钟，离心并过滤，残渣继续用30ml水■乙膳（1：9）溶液分两次超声提取，每次30分钟，合并所有提取液，用0.2mlo/L的盐酸溶液调节pH二2,并用水■乙月青（1：9）溶液定容至100ml,混匀。准确吸取10ml提取液，待过柱净化。用5ml乙腊和5ml超纯水预淋洗活化AccuBONDII0DS-C18萃取柱，将10ml提取液转移到萃取柱中，然后分别用水和乙腊各5ml洗涤，弃掉流出液，抽干萃取柱后用5ml氨水■乙腊（1：9）溶液洗脱，重复两次，收集洗脱液。于40°C水浴氮气吹干，用流动相溶解残渣，定容至2ml,过0.22um微孔有机滤膜，待测。1.4色谱质谱条件1.4.1超高效液色谱条件色谱柱：WatersAcquiltyUPLCBEHC18（1.7um,2.1×100mm）,进样体积lOul,流速：0.3ml/min〃流动相梯度见表1・表1色谱分离梯度条件1.4.2MS/MS质谱条件离子化方式：ESI+,毛细管电压：3.00KV,锥孔电压：22V,二级锥孔电压：3V,RF电压：0.3V;离子源温度：100°C,锥孔反吹气流量：50L/hr,脱溶剂气流量：800L/hro质量分析器：低端分辨率LMLensl：13.5V,高端分辨率HMLensl：13.5V,离子能量：1：0.5,入口透镜电压：IV,出口电压：1.0V,低端分辨率LMLens2：13.5V,高端分辨率HMLens2：13.5V,离子能量:2：0.5。采用MRM多反应离子检测模式，以保留时间、母离子m/zl67及两个子离子m/zl25.85进行定性分析，以子离子m/zl25进行定量分析。在此条件下，灭蝇胺的MRM色谱图见图lo图1样品中灭蝇胺的MRM色谱图2结果与讨论2.1色谱柱选择UPLC采用的色谱柱填料粒径为1.7umC18...