人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的构建及验证

论著人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的构建及验证房世娣府赵晓瑞府陈继军府安晨府南建军的毛晓燕兰州生物制品研究所有限责任公司第四研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心R甘肃兰州730046摘要:目的利用人源抗狂犬病病毒ScFv噬菌体抗体库E构建单克隆抗体(单抗)轻、重链质粒彳瞬时表达E纯化后验证具有高中和活性的单抗§方法以从ScFv噬菌体抗体库中筛选获得特异性抗体为模板『PCR扩增抗体轻、重链可变区序列『构建人源全分子抗体瞬时转染质粒[轻、重链质粒混合后转染HEK293EBNA1细胞f瞬时表达全分子抗体』采用MabseleclSuRe介质手动亲和纯化抗体iNanoVue超微量分光光度计测定蛋白质的质量浓度『快速荧光灶抑制试验(rapidfluorescentfocusinhibitiontesifRFFJT)进行体外中和效价验证H结果成功构建22个轻链质粒『15个重链质粒彳通过真核细胞瞬时表达后『经手动亲和纯化后R获得22株单抗目除1株抗体外孑其余21株抗体的蛋白质量浓度均>300ng/mLJ部分抗体纯度均在9。%以上M中和活性结果显示日株在1500^1800]U/mg之间J8株在8。广1500IU/mg之间"株在500^800[U/mg之间J其余2株在5。。lU/mg以下1结论成功构建并验证获得20株中和活性>500lUJmg的人源抗狂犬病病毒单抗『为单抗混合制剂的研究奠定了基础K关键词:狂犬病病毒』单克隆抗体!噬菌体抗体库!快速荧光灶抑制试验中图分类号:R392文献标志码:A文章编号:1005~5673(2019)04~0007_07DOI:10.13309/j.cnki.pmi.2019.04.002ConstructionandvalidationofhumanizedantFrabiesvirusmonoclonalantibodiesFANGShidi®ZHAOXiaoru:HTCHENJijunifANChen排NANJianju浦MAOXiaoyanFourthDepartmentofResearch^LanzhouInstituteofBiologicalProductsCoJLtd.ofCenterforGansuProvincialVaccineEngineeringResearch^Lanzhou730046府GansuProvincewfChinaCorrespondingauthor:MAOXiao_yantfE~mail:maoxiaoyan2002@163.come$werepurifiedmanuallybyMabseleciSuReaffinity.Theproieinconcentrationwasdeierminedbyamicrospectropholomelerifandtheneutralizationactivitywasverifiedbyarapidlluorescenlfocusinhibitiontest(rapidfluorescentfocusinhibitiontestlifRFF1T).ResultsAlotalof22lightchainplasmidsand15heavychainplasmidsweresuccessfullyconslrucled.Aftertransientexpressionbyeukaryoticcellsanimanuallyaffinitypurificationlif22monoclonalantibodieswereprepared.Theaniibodylevelwasmeasuredbythemicro$peclrophotometeriffonlyonestrainwas<300ug/mLandtheother21anlibodies>300ug/mL.ThepuriIyofsomeantibodieswas>90%,TheneuiralizalionactivityoftheantibodywasdelectedbyRFFITHfandthespecificactivityof5monoclonalantibodieswasbetween15001800IU/mgHf8strainsbetween8001500IU/mglif7slrainsbetween500800IU/mglif2strainsbelow500IU/mg.ConclusionWeconstructedandverified20slrainsofhumanizedantirabiesmonoclonalantibodieswithaneutralizingactivitygreaterthan500IUmgsuccessfullyHflayingafoundationinsearchforlhemixedlormulalionolhumanizedantirabiesvirusmonoclonalaniibodies.Keywords:Rabiesvirus!MonoclonalantibodyIPhageaniibodylibrary!Rapidfluorescenlfocusinhibitionte$t(RFF1T)基金项目:兰州市科技重大专项(2017_02_1)作者简介:房世娣(1984女寸医学生物学工程师『从事基因工程抗体的研究N通信作者:毛晓燕|)研究员ifEmail:maoxiaoyan2002@163.com狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabiesvirusJRV)引起的人兽共患病W其可能引起的有急性和进行性脑炎E病死率是感染性病原中最高的疾病之一[1]IHAMPSON等[2]研究显示彳在全世界每年有59000人死于狂犬病彳且大多数集中在一些发展中国家的农村地区N2017年中国因狂犬病死亡人数为502例I居全球首位N根据WHO的处理原则彳狂犬病II/III级暴露应立即处理伤口彳接种狂犬病疫苗并结合狂犬病免疫球蛋白(rabiesimmunoglobulintRIG)f目前2可供临床使用的RIG为人狂犬病免疫球蛋白(humanrabiesimmunoglobulinjHRIG)和马狂犬病免疫球蛋白(equinerabiesimmunoglobuiiniERIG)i这两...

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