p16和Ki-67双染检测，助力宫颈癌前病变诊断研究发现，全球绝大部分宫颈癌病例都是由人乳头瘤病毒（HPV）所引起，只有长期持续感染高危型HPV病毒才会导致高级别宫颈上皮内瘤变（CIN），进而发展为宫颈癌。宫颈癌防治的关键在于筛查出高风险人群，找出高级别CIN患者，及时干预。采用免疫组化双染技术在宫颈上皮细胞或组织中检测两种生物标志物p16和Ki-67以辅助诊断宫颈癌前病变已成为当前各国研究的重点。日前，在中华医学会第十四届全国细胞病理学会议暨细胞病理学读片会上，中山大学附属第一医院病理科主任余俐教授同与会病理及肿瘤领域的专家深入交流并探讨了CINtec?PLUSp16和Ki-67免疫细胞化学双染检测对于辅助宫颈癌前病变诊断的重要性。p16和Ki-67双染检测辅助细胞学诊断，有效降低阴道镜转诊率细胞学在很多国家是标准的宫颈癌筛查方法，但在临床实际操作中存在诸多问题：由于敏感性较低、重复性差，检测结果存在一定的假阴性率和假阳性率；针对无明确意义的非典型鳞状上皮细胞（ASC-US），不能明确是癌前病变还是反应性细胞改变；实验室间的结果差异大；对腺癌不敏感；筛查间隔频繁，至少每2~3年就要进行一次检测。余俐教授指出，较为理想的宫颈癌筛查手段应该是在提高细胞学检测敏感性的同时，能够不损失其特异性或者可以通过客观的生物标志物，标记出高级别病变的细胞，以辅助细胞学检测结果的判读和诊断。2012年，美国病理学家协会（CAP）和美国阴道镜和宫颈病理学会（ASCCP）联合发布了下生殖道HPV相关的鳞状病变的命名标准化计划（LAST）指南，最终认定p16是唯一有足够的临床研究数据证实其可用于宫颈癌前病变诊断的生物标志物。对于正常细胞的HPV一过性感染，免疫组化检测不能检测到p16表达，而HPV转化性感染则会引起p16的过度表达，并被免疫组化检测到。因此，p16可作为HPV感染的间接标志物，广泛应用于宫颈癌前病变诊断。LAST指南建议使用特定克隆号（E6H4）的p16INK4a抗体作为检测HPV感染是否影响到细胞周期调控的生物标志物，该克隆号是我国唯一获得国家食品药品监督管理总局（CFDA）认证的p16INK4a抗体。2015年11月26日，CFDA批准罗氏诊断CINtecPLUS细胞学试剂盒[抗p16（E6H4）和Ki-67（274-11AC3）单克隆抗体鸡尾酒试剂（免疫细胞化学法）］用于宫颈脱落细胞学诊断。p16在细胞周期的阻滞期具有抑制细胞增殖的功能，而另一种生物标志物Ki-67则指示细胞增殖。在同一个细胞周期中，如二者同时表达则提示细胞周期失调。CINtecPLUS细胞学双染检测能够同时检测出HPV持续感染后过表达的p16和Ki-67。如双染阳性，强烈提示CIN2+病变，需立即进行阴道镜检查；如双染阴性，可随访一年后复查，显著降低阴道镜转诊率，减少患者不必要的检查与治疗。2015年Besthesda指南推荐免疫细胞化学可辅助细胞学诊断。指南指出，在检出高度鳞状上皮内病变（HSIL）中，p16和Ki-67双染与细胞学检测的特异性相当，且具有高敏感性。余俐教授表示，CINtecPLUS检测能更准确地发现潜在高级别病变患者，提高宫颈癌前病变检出率，弥补现有宫颈癌细胞学检测的不足，降低漏诊率，减少过度诊断。研究证实双染检测灵敏度与特异性高美国食品与药物管理局（FDA）注册的美国本土最大型的前瞻性宫颈癌筛查临床试验ATHENA研究，对47208例受试者进行了基于cobasHPV初筛策略和以细胞学为基础筛查策略的3年随访试验。结果显示，针对HPV16和18型以外的12种高危型HPV阳性患者，CINtecPLUS检测能够得到简单、客观的结果，明确提示患者风险以及是否需转诊阴道镜。CINtecPLUS阳性患者在3年内进展为CIN3+病变的风险远高于细胞学ASC-US以上的患者，具有更好的阳性预测值，需要转诊阴道镜以减少漏诊。CINtecPLUS阴性患者，3年内发生CIN3+病变的风险低于细胞学未见上皮内病变或恶性病变（NILM）的患者，具有更好的阴性预测值，不需要转诊阴道镜，帮助减少过度治疗。前瞻性PALMS研究入组来自5个欧洲国家的27349例病例。大量临床数据显示，CINtecPLUS双染检测具有高灵敏度与高特异性（以CIN2+为终点），可用于ASC-US分流、低度鳞状上皮内病变（LSIL）分流、HPV初筛后对高危型HPV阳性者分流、对细胞学阴性但高危型HPV阳性患者...