香菇多糖MPSSS免疫毒性研究2.青岛为明学校，山东青岛2660713.枫叶国际学校，重庆4021604.讯得达国际书院，广东深圳5180005.北京市西城区育翔小学，北京100032摘要：目的：检测新型香菇多糖分子MPSSS的免疫毒性。材料方法：制备小鼠脾细胞单细胞悬液，用MTT法检测香菇多糖对小鼠脾细胞的抑制率，对照组为多西他赛及香菇多糖Lentinan。结果：MPSSS和Lentinan均可以促进脾细胞增殖，且前者促增殖效果更好，而多西他赛明显抑制脾细胞。结论：MPSSS不具备免疫毒性，可以促进脾细胞增殖，且效果优于临床已经应用的Lentinan，该分子可作为临床抗肿瘤的候选分子。关键词：香菇多糖；脾细胞；多西他赛；抑制1前言人类迄今为止从未停止过对于癌症的疗法的探索。其中，人体免疫细胞如B细胞及T细胞，巨噬细胞，NK细胞和树突状细胞都可以对肿瘤细胞进行免疫防护。尤其是T细胞，可以对恶性肿瘤进行细胞免疫。多年来，研究人员研究出了多种治疗癌细胞的方法，如靶向治疗等。但是国内临床上主要用的都是化疗，放疗或者切除，尤其是化疗。但化疗药不光针对肿瘤细胞，对病人机体的杀伤程度也很强，使病人有恶心，呕吐，及腹泻等消化道症状，导致毛发的脱落还有骨髓抑制性及全身过敏反应【1】。因此，如果有新兴技术对治疗癌症效果更佳，我们应该推广该技术到临床。目前，我国学者近年来发现了新型香菇多糖分子MPSSS，但是其免疫毒性尚未得到检测。1968年日本千原吴郎首次从香菇中提取出了香菇多糖【2】。目前已得到了广泛的临床应用。本研究拟研究MPSSS的免疫毒性，并与化疗药及Lentinan进行比较，为香菇多糖MPSSS的新药研究提供基础数据。2试验材料一块活体雌性小白鼠脾脏，两块毛玻璃片，PBS细胞培养液，离心管与离心机，国产香菇多糖MPSSS溶液,日本香菇多糖letinan溶液，多西他赛注射液，滴管枪，测试用96孔板，光学显微镜。【日本香菇多糖】：商品名：天地欣，计量为1毫克*10支【多西他赛】：江苏恒瑞医药股份有限公司生产，剂量为0.5毫升20毫克。【PBS】：稀释所用PBS为HyClone生产，计量为500毫升。3试验假设根据我们对于传统化疗药物弊端的理解，常规化疗药物如多西他赛不仅对于肿瘤细胞有一定量的杀伤作用，还会对人体自身免疫细胞产生攻击作用，导致放疗患者易出现掉发，食欲不振，头晕恶心等副作用。然而采用新型香菇多糖疗法其目的为利用并促进自身B免疫细胞的活性及识别肿瘤细胞的能力诱导主动抗癌，故将会规避传统化疗药物攻击自身免疫细胞的风险。小鼠脾脏为机体免疫器官，经研磨取样培养将会获得大量活体免疫B细胞，故我们假设MPSSS溶液与Letinan溶液都会促进B细胞数量的增长而多西他赛溶液会导致B细胞的大量死亡。4试验方法4-1提取脾脏白细胞并稀释1)麻醉杀死一只实验室用雌性小白鼠，取小鼠新鲜脾脏，浸入PBS并于冷藏状态下放置一小时；2)用两块毛玻璃板挤压脾脏，将挤压出的血液以及淋巴液在PBS中稀释；3)将溶液用滴管移入离心管，并把液体总体积配至4毫升；4)离心三分钟，使用红细胞裂解液，一分钟后为防止免疫细胞被解裂再次稀释至5毫升；迅速放入离心机中；最后得到免疫B细胞稀释液。5)吸走稀释液上层浊液，利用移液器将下层白色细胞团吸起并置于测试用96孔板横3纵4的12个孔中。4-2细胞分组1)用移液器取100微升的培养液分别注射于测试用96孔板第一行三个对应位点。将本组设为对照组，标记为C1,C2,C3。2)用移液器分别取100微升的国产香菇多糖MPSSS置于第二列的三个位点中，标记为M1，M2,M3。3)分别取1微升的化疗药物多西他赛置于第三列的三个位点中，标记为D1,D2,D3。4)分别取5微升的日产香菇多糖Letinan置于第四列的三个位点，标记为L1,L2,L3。该三组设为实验组。5实验结果5-1观察结果经观察培养板发现，M组细胞聚集体积略大于C组，L组细胞聚集较C组细胞聚集体积相近，D组细胞很少，不堆积，观察不到明显细胞聚集物。5-2试验数据分析A:样本中细胞总数单位:个B:样本中活细胞总数单位:个C:样本中细胞活率单位:%相比较而言，多西他赛的毒性最强。三组实验结果平均之后，加入国产香菇多糖的实验组细胞活率比日产的实验组要高出约12.60%，比对照组高出11.93%，比加入多西他赛的实验组...