血管紧张素II心肌细胞损伤作用

血管紧张素II心肌细胞损伤作用倪建毛1王学群1倪彩娥2(1江丙省鹰潭市中国人民解放军第184医院急诊科354000)(2江丙贵溪化肥有限责任公司职工医院335424)【摘要】目的观察血管紧张素II刺激心肌细胞后SOD值及细胞凋亡率、并且探讨其机制。方法1、取SD乳鼠心肌细胞做原代培养,分为空白对照组、Angll刺激组(分为不同浓度组);2、空白对照组不加任何刺激物。3、Angll组用浓度分别为40、60、80、100umol/L的Angll刺激乳鼠心肌细胞48小时;4、用化学比色法测定SOD活力,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果Angll刺激乳鼠心肌细胞48小时后细胞凋亡明显、SOD活性降低,且不同浓度Angll组间差异显著(P<0.05)。结论血管紧张素II可引起鼠心肌细胞损伤,并随浓度增加而加重。【关键词】超氧化物歧化酶血管紧张素II心肌细胞【中图分类号】R972【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2012)22-0027-02心肌细胞的凋亡和坏死在急慢性心力衰竭过程中起了重要的作用,在心力衰竭情况下RAAS(renin-angiotensin-aldosteronesystem)系统激活,血管紧张素ll(Angll)增加,在心肌肥厚及心力袞竭的发生、发展中起着重要的调控作用。木试验在体外乳鼠心肌细胞的原代培养基础上,通过观察血管紧张素II刺激下心肌细胞SOD活力、细胞凋亡,探讨Angll损伤心肌细胞可能的机制。一、材料(一)细胞来源:新生SD乳鼠心脏分离心肌细胞做原代培养,SD乳藏由苏州大学动物房提供。(二)试剂DMEM培养基、血管紧张素II、二甲基亚砜、胰蛋白酶、EDTA,SOD检测试剂盒,AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒,(三)仪器BB-5060型CO2培养箱、1X70型倒置相差显微镜、SW-CJ-1F型净化工作台、LDZ5-2型高速离心机、ULT1386-V34型-80°C冰箱、MDF-U332型-20°C冰箱、HZ-9211K恒温震荡器、DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱、721分光光度计、XW-80A旋涡混匀器、流式细胞仪(型号:FACSVantageSE)。二、方法(一)SD乳鼠心肌细胞的提取、纯化和培养采用无菌操作的方法取SD乳鼠心脏,用PBS缓冲液反复清洗,用眼科小剪刀剪成l-2m大小的块状,加入0.25%的胰蛋白酶II消化液中,置37°C培养箱孵化5-10min,将上层液体转至DMEM液管中,1000r/min离心3-5min,去上清,用DMEM培养基重悬细胞,保存于37°CCO2培养箱。将未消化完的心肌组织块再加入消化液,重复上述步骤,直至所冇心肌组织消化完毕为止。将所得的心肌细胞转至70ml的细胞培养瓶中,37°CCO2培养箱培养60〜90min,待成纤细胞贴壁后,吸取上层细胞悬液至新的培养瓶中,计数后按5&times;105个/ml将细胞加至96胞培养板,置5%CO2和95%02的培养箱37"C培养,吋观察和记录心肌细胞的生长状况。(二)试验分组(96孔板中对照组和Angll组分四个浓度组分别取10孔)1、对照组:仅用加入2%新生小牛血清的DMEM培养基。2、Angll组:DMEM培养基中分别加入浓度为20、60、80、100umol/L的血管紧张素II作用48小时。每种处理10个复孔,置于37°C含5%CO2饱和水汽培养箱中培养。(三)SOD、细胞凋亡率的测定1、标本收集细胞按上述不同刺激培养48小吋后,吸取培养液上清,置于-20°C保存待测SOD;吸除培养板中培养基上清,剩余细胞收集后用于细胞凋亡率的测定。2、SOD测定、细胞凋亡率均按照试剂盒说明书步骤进行。三、数据处理采用SPSS11.0统计软件进行分析,所有数据用均数&plUSmn;标准差表示,组间比较用方差分析,P<0.05认为差异有统计学意义。四、结果Ang-ll刺激乳鼠心肌细胞48小吋后,培养上清液中SOD浓度明显低于空闩对照组(P<O.O5),II随Angll浓度加大SOD下降明显,不M浓度组间差异显著(P<O.O5)(见表1)。各组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.05),且随Angll浓度加大凋亡率升高明显,不同浓度组间差异显著(P<0.05)(见表2)注:与空白组和Angll组比较▽P<0.05,不同Angll浓度组间比较P<0.05(细胞凋亡率通过流式细胞仪测定)。五、讨论慢性心衰过程RAAS系统被激活,致血管紧张素II浓度增加,导致心肌损伤。可表现为细胞通透性增加,心肌酶(如CPKMB,ASTMBCTnl)外漏和心肌细胞凋亡、坏死。本文结果显示加入Angll后心肌细胞活力降低,细胞的凋亡率显著增加,与文献报告一•致[1]。Kajsytur...

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