人工醜关节置换术后感染耐药菌鉴定研究【中图分类号IR473.6【文献标识码】C【文章编号】1672-3783(2012)06-0373-01【摘要】：目的总结分析髓关节置换术后感染细菌耐药性特点，为该并发症的诊断和治疗提供一些依据。方法选取我院收治髓关节置换后感染病例，抽取关节炎液分别进行富集和抗药性筛选。然后挑选多重耐药性的菌株进行16SrDNA鉴定。结果37份样本共富集到1638个菌株；氨节青霉素抗性743个菌株；氨节青霉素和制霉菌素抗性78个菌株；氨节青霉素、制霉菌素和链霉素抗性9个菌株；多重耐药性菌株分属于鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。结论人工髓关节关节感染的细菌多重耐药性是引起感染难以治愈的一个因素，应引起临床医生的注意。【关键词】：人工骯关节；感染；16SrDNA；鉴定人工骯关节置换术已经成为治疗髓关节疾病的标准手术，而骯关节置换后感染通常被称为“灾难性并发症”,由于抗菌药物的日益滥用，导致病原菌的耐药性日趋加重,同时致病菌株亦呈多样化，与传统骨关节感染治疗方法及用药理论相比，发生了很大变化[l]o为此，对我院人工髓关节置换术后感染耐药菌株进行了鉴定分析。1临床资料1.1一般资料全部病例来自本院2008年10月至2011年7月门诊、住院全部37名患者，男20例，女17例，年龄40-65岁，平均53.8岁。31例为外院手术后感染,6例为我院手术后感染。感染发生时间为置换术后15天至6年。13例患者出现低热，所有患者均有不同程度的疼痛和髓关节活动障碍，需扶拐行走。9例感染伴有窦道形成，反复流脓。本组43例患者均安全渡过围手术期。1.2诊断标准（1）置换关节后曾有明确的关节感染症状；（2）置换关节曾有明确的关节感染症状；（3）如有窦道形成则可确断;（4）如无窦道形成，术前关节穿刺培养或术中培养为阳性则可明确诊断；（5）术中病理明确为化脓性感染可确诊。2取样及细菌筛选方法2.1取样方法若患者骯关节部位没有形成窦道，则在X光下用穿刺针穿入髓关节，确定穿刺针在关节腔内后抽取关节液。若患者已形成窦道，则用硅胶管沿窦道穿入关节腔，确定硅胶管已进入关节腔后，抽取关节液。2.2耐药菌筛选将抽取的关节液用生理盐水适当稀释后取100UL涂布于胰蛋白脓肉汤富集培平板和抗性平板上。选取三种不同抗菌机制的抗生素制作抗性平板，胰蛋白牒肉汤培养基中分别添加(1)氨节青霉素；(2)氨节青霉素和制霉菌素(3)氨节青霉素、制霉菌素和链霉素的抗性平板。均匀涂布后，置生化培养箱371培养24h,形成单菌落后计数。2.3细菌鉴定方法(1)采用上海生工生物工程有限公司的细菌基因组提取试剂盒提取基因；(2)釆用16SrDNA全序列鉴定，16S通用引物：P1：5'-GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3',P2：5'-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3'。PCR反应体系及程序：10Xbuffer(Mg2+)5.0uL,dNTPs(2.5inM)?4.0uL,Pl(20uM)和P2(12.5uM)各2.0uL,ExTaqDNA聚合酶(5U/uL)1.0uL,Template?DNA2.0uL,ddH2O34.0uL；95°C预变性4min,95°C变性45S,56°C退火45S,72°C延伸90S共40个循环；72匸终延伸lOminoPCR产物用0.8%琼脂糖凝胶电泳分离检验，紫外下观察并割胶回收，PCR产物回收试剂盒为捷瑞生物工程(上海)有限公司；(3)PCR产物后连接T载体，挑选阳性克隆后送上海生工生物工程有限公司测序；(4)根据测序结果提GenBank进行比对。3结果3.1耐药细菌筛选将提取的关节液在胰蛋白腌肉汤富集培平板和不同的抗性平板上培养后，得到数量不等的单菌落，随着抗生素数量的增加，单菌落的数量大量减少。在氨节青霉素、制霉菌素和链霉素的抗性平板共等到9个单菌落，从这9个单菌落的形态上将其分为三类，然后从每种类型中分别挑选出1株菌进行16SrDNA鉴定（结果如表1所示）。3.2耐药细菌鉴定3.3鉴定结果4讨论人工关节置换术后感染是人工关节置换术的严重并发症是造成人工关节置换术失败的主要原因［2］。尽管人工骯关节置换手术中的无菌操作技术及抗菌药物的应用已得到不断完善，但髓关节置换后的切口感染仍然没有完全被控制，感染原因一是手术中激素的大量使用降低了患者的免疫力，二是一些术中残留死腔，引流不当等原因引起。而且在临床中长期广泛大量地使用抗生素造成髓关节置换感染后细菌耐药性升高；直接增加了患者感染...