PBCA-bFGF-NP的体外活性考察刘慧娜1王玮2（1郑州市骨科医院河南郑州450000；2河南大学药学院河南开封475001）【摘要】目的以碱性成纤维生长因子（bFGF）为模型药物，对bFGF纳米粒体外活性进行考察。方法以鸡胚尿囊膜（ChorioallantoicMembrane,CAM）为动物模型，以无菌生理盐水作为阴性对照组，bFGF原料药为阳性对照组，分別比较高、中、低剂量PBCA-bFGF-NP对CAM血管增生的影响。结果PBCA-bFGF-NP能够促进血管增生；统计结果表明：高、中剂量组与阴性对照组、低剂量组有明显的差异，而高、中剂量组和阳性对照组没有明显的差异。【关键词】碱性成纤维生长因子鸡胚绒毛尿囊膜纳米粒血管生长【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）23-0022-031仪器与试药α-铽基丙烯酸正丁酯（广州白云医用胶股份有限公司）碱性成纤维生长因子（bFGF）冻干粉剂（暨南大学生物研究中心）三羟基甲基氨基甲烷（上海化学试剂站分装厂）bFGF铽基丙烯酸正丁酯纳米粒（自制）种蛋（开封大地健康食品有限公司）生理盐水、苯扎溴铵0.5um的微孔滤膜所用水皆为SZ-93自动双重纯水制备系统制备；其它试剂均为市售分析纯产品。bFGF试剂盒（上海麦莎生物有限公司提供进口分装）Bio-Tek-Model酶标分析仪（美国）CL-3型恒温加热磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）YP-600型电子天平（上海第二天平仪器厂）AB135-S电子天平（瑞士梅特勒-托利多）SHA-C型水浴恒温振荡器（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）JEM-100CX-II电子透射显微镜（日本电子）TGL-165型冷冻高速离心机（上海安亭科学仪器厂）SZ-93型自动双重纯水制备系统（巩义市英峪予华仪器厂）pHS-25型数显酸度计（上海天达仪器有限公司）KS-250D型超卢波清洗器（宁波科生仪器厂）101型电热鼓风干燥箱（北京中兴伟业仪器有限公司）BD-239LT型低温冷柜（山东海尔集团）HPX-150B型电热恒温培养箱（上海悦丰仪器仪表冇限公司）微量移液器照蛋灯（自制）超净工作台牙科细砂轮眼科镊子、剪数码相机解剖显微镜2试验方法2.1动物模型的选择血管生成是指从已经存在的毛细血管或微静脉通过内皮细胞增殖和迁移，以芽生或非芽生的方式生成新的毛细血管的过程。筛选血管生成活性物质可利用内环境与人体相似II血管新生的过程易于观察的动物模型来检测。近30年来，科学工作者建立了很多新血管生成的模型用于血管生成的研究[1],如：兔或大鼠的角膜囊（眼前房）模型、仓鼠颊囊模型和鸡胚绒毛尿囊膜模型等。前两种模型，是在动物体上进行观察，有诸多不便，无法同吋进行大样本实验，操作技术要求高，而鸡胚绒毛尿囊膜模型(CAM)较为理想。CAM因具有方便、价廉、计数指标客观成熟、实验周期短、重复性良好、易于大样本实验等特点而得到了广泛应用［2〜4］。本论文研究采用CAM模型，对PBCA-bFGF-NP对能否促进血管生成进行了初步研究。在鸡胚胎发育期间，胚胎本身产生三种重要的胚膜：羊膜(amnion)、绒毛膜(chorion)和尿囊膜(allantois)(图4—1)。当胚胎发育到原肠期后，在胚胎周围开始突起环状褶皱，环状摺皱不断生长，逐渐向中间相互愈合成围绕着胚胎的两层保护膜：内层为羊膜，外层为绒毛膜。羊膜腔(amnioticcavity)中充满液体，称为羊水。胚胎浸在羊水中，使胚胎免于干燥和各种机械损伤。在形成羊膜的同时，还形成了能适应水中呼吸和将代谢废物排到外界需要的特殊器官一一尿囊。尿囊是从胚胎原肠后部突出的一个囊，位于羊膜和绒毛膜中间的空腔中，尿囊内的腔称尿囊腔(allantoiccavity)，胚胎代谢所产生的尿酸即排到尿囊腔中。此外，尿囊还充当胚胎的呼吸器官，由于尿囊膜上有着丰富的毛细血管，胚胎可以通过多孔的卵膜或卵壳，与外界进行气体交换。2.2种蛋的选择和消毒选择质量相近(50±5)g，表皮无污染、无破损，蛋形规范(呈椭圆形)，气室均匀，受精率大于90%,产出时间在一周以内的新鲜种蛋。温水清洗2次，用1:1000苯扎溴铵的纱布将种蛋擦拭3遍，清水洗净后用纱布拭干。2.3种蛋的孵育将消过毒的种蛋置于培养箱中，温度为(37.5±0.5)°C,培养箱中放入水盘以保持相对湿度45%〜60%环境中孵育，要有通气孔并定吋开箱凉蛋，并保持温度不低于...