?1886?药物分析杂志ChinJPharmAnal2009,29(11)凝胶排阻色谱法研究阿胶中蛋白质及多肽相对分子质量分布规律汪冰,肖新月,程显隆,田守生,林瑞超3.山东东阿阿胶股份有限公司研究所,聊城252201)2*1131(1.中国药品生物制品检定所,北京100050;2.山东省药品检验所,济南250101;摘要目的:建立阿胶中水溶性成分凝胶排阻色谱分析方法,研究阿胶中蛋白质及多肽的相对分子质量分布规律,为阿胶质量评价提供依据。方法:采用TSK-GELG4000PWXL(7.8mm300mm,平均孔径500A),流动相为0.05mol!L-1磷酸盐缓冲液(pH=7.2),流速0.4mL!min-1,检测波长280nm,以-淀粉酶、胰岛素为标记物,室温下测定16个企业生产的40批阿胶样品,并应用TQAnalyst软件进行样品图谱主成分分析。结果:发现阿胶含有的蛋白质及多肽的相对分子质量主要集中在6103~2105,不同企业的产品中蛋白质及多肽的相对分子质量分布有一定规律。结论:该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于阿胶中蛋白质及多肽的分析。测定结果反映出不同企业间,甚至同一企业不同批次产品有差异。提示阿胶原料与生产工艺值得注意,为保证阿胶质量稳定,应该进行生产过程控制。关键词:阿胶;水溶性成分;蛋白质及多肽;凝胶排阻色谱法;相对分子质量分布;主成分分析:R917文献标识码:A:0254-1793(2009)11-1886-06Studyonrelativemolecularmassdistributionofproteinandpeptideindonkey-hidegluebygelexclusionchromatographyWANGBing,XIAOXin-yue,CHENGXian-long,TIANShou-sheng,LINRui-chao(1.NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProducts,Bei激ng100050,China;2.ShandongProvinceInstituteforDrugContro,l激nan250101,China;3.InstituteforDrugControlofShandongDongEE激aoCO.LTD.,Liaocheng252000,China)21*131AbstractObjective:Todevelopagelexclusionchromatographymethodforstudyofrelativemolecularmassdistributionofproteinandpeptideindonkey-hideglue.Methods:GPCwasperformedonaTSK-GELG4000PWXLcolumn(7.8mm300mm,averageporesize500A)with0.05mol!L-135-1phosphatebufferedsolution(pH7.2)attheflowrateof0.4mL!min,anddetectionat280nm.Results:Relativemolecularmassofproteinandpeptideindonkey-hideglueisintherangesof610-210,andthereareregularpatternintherelativemolecularmassdistributionofproteinandpeptideindonkey-hideglue.Conclusion:Thedevelopedmethodisaccuratewithhighrepeatabilityandstability,whichcanbeusedfortheanalysisofproteinandpeptideindonkey-hideglue.Theresultshowsthattherearedifferenceinproductsamongdifferentmanufacture,evenamongdifferentbatchs,whichcausedbydifferentproductiontechnique.Thecontrolofproductproductionprocessisveryimportanttoensurethequalityofdonkey-hideglue.Keywords:donkey-hideglue;water-solubleconstituen;tproteinandpeptide;gelexclusionchromatography;distributionofrelativemolecularmass;analysisofmainconstituent阿胶是马科动物驴(EquusasinusL.)的皮经煎熬﹑浓缩而成的干燥胶块。药用历史已有2000多年,从古至今,一直作为滋阴润燥﹑补血止血的良药。其主要成分为胶原蛋白部分水解产生的多肽、多种氨基酸、金属元素及硫酸皮肤素、生物酸等[1]阿胶的质量,该方法测定的总氮量包括有机氮和无机氮,方法粗放,专属性不强。为增强阿胶质量的可控性,作者建立了柱前衍生化HPLC法测定阿胶中羟脯氨酸及胶原蛋白的主要水解氨基酸甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸含量的方法[2]。。该方法准确、可靠,具2005年版中国药典采用定氮法测定总氮量以控制(-i:l@org.有良好的重复性和稳定性。然而,该方法测定的是药物分析杂志ChinJPharmAnal2009,29(11)?-11887?阿胶水解后的氨基酸,不足以反映组成阿胶的蛋白质类成分的原生状态。为此,本文研究建立了阿胶中水溶性成分凝胶排阻色谱分析方法(gelexclusionchromatography,简称GPC法),不经水解直接分析阿胶中的可溶性蛋白质及多肽的相对分子质量分布规律,并比较16个企业40批产品的差异,以期更客观、科学地评价阿胶的质量情况。1...