口腔癌患者血清核磁共振代谢组学探究［摘要］目的应用核磁共振代谢组学方法研究口腔癌患者血清代谢组的特征及其变化。方法健康人血清(健康组，10例)和口腔癌患者血清(口腔癌组，10例)样本，采用BRUKER500MHz超导核磁共振波谱仪进行检测,运用PCA分析方法，研究口腔癌患者血清代谢组的特征，探讨相关生化过程的改变。结果健康组与口腔癌组患者血清代谢谱有不同的代谢特征。口腔癌患者血清中氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、颔氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸)，谷氨酸、糖蛋白、甲胺和二甲胺、葡萄糖的含量是升高的，而乳酸和胆碱的含量降低。结论根据血清代谢物的变化可以区分健康人和口腔癌患者。这种基于核磁共振氢谱的代谢组学方法可为口腔癌的诊断提供可靠代谢依据。［关键词］口腔癌；代谢组学；核磁共振［中图分类号］R658［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2013)02(c)-0020-02口腔癌是一类发生于唇、腭、舌、口底和牙龈等部位的上皮源性恶性肿瘤。目前口腔癌多采用以手术为主的治疗方法，但术后患者5年生存率只有50%左右，同时还具有较高的复发风险⑴。核磁共振1H谱(nuclearmagneticresonance1H,NMR1H)是研究生物样品代谢变化的一种常用手段，近年来基于核磁共振的代谢组学方法已经得到广泛应用[2-6]o本文应用核磁共振1H谱并结合多变量分析方法研究口腔癌患者血清的代谢组特征，寻找与癌变相关的血清代谢标志物，阐明口腔癌患者血清生化过程的改变。1材料与方法1.1样品收集于广东药学院附属第一医院收集口腔癌患者血清样本10例和健康人血清10例(收集时间：2011年11月〜2012年4月)，置-8CTC超低温冰箱贮存。1.2样品预处理采样前，将所有血清样本解冻，在49下，10000g离心10mino取400uL±层血清加至5mmNMR测试管中，后加入100UL0.2mol/L磷酸缓冲溶液(0.2mol/LNa2HP04-0.2mol/LN&H2P04,pH=7.4)和50uL重水，振荡混匀。1.3NMR实验每一个样品均采集Carr-Purce11-Meiboom-Gill(CPMG,relaxationdelay-90-(t-180-t)n-acquisition)氢谱，总回波时间为100ms,3s延迟时间，64k数据点，采集次数为128。化学位移定标为乳酸甲基双重峰51.33o1.4数据预处理采用软件TOPSPIN2.0对所有1HCPMG谱进行自动积分,积分区间50.5〜4.6,积分间隔0.01o主成分分析前对每一个谱的积分值进行归一化处理，后将归一化值导入软件Simca-P12.0(Umetrics,Sweden)中进行主成分分析。1.5统计学方法采用SPSS(Version13.0,SPSSInc.,USA)软件对正常人和口腔癌患者血清代谢物的归一化积分值做独立样本t检验。以P[参考文献][1]BrandweinGM,TeixeiraMS,LewisCM,etal.OralSquamousCellCarcinoma:HistologicRiskAssessment，butNotMarginStatus,IsStronglyPredictiveofLocalDisease-freeandOverallSurvival[J],AmJSurgPathol,2005，29(2)：167-178.[2]杨永霞，杨生义，梁敏锋，等.基于核磁共振波谱的乙肝患者血清代谢组研究[J].第二军医大学学报，2010,31(3)：288-291.[3]高岗，杨根金，娄子洋.肾虚证大鼠尿液的核磁共振谱代谢组学研究[J].第二军医大学学报，2009,30(5)：565-568.[4]LehnhardtFG，BockC,RohnG,etal.Metaholicdifferencesbetweenprimaryandrecurrenthumanbraintumors：a1HNMRspectroscopicinvestigation[J]・NMRBiomed,2005,18(6)：371-382.[5]陶晓峰，杨根金，王晓钧，等•离体眼眶肿瘤及正常组织超高场磁共振波谱特点的比较[J].第二军医大学学报，2006,27(8)：882-884.[6]杨永霞，陈阿丽，梁敏锋，等•慢性乙肝与重症乙肝患者血清代谢组比较[J].中国医药导报，2010,7(18)：27-2&[7]杨永霞，梁敏锋，陈阿丽，等•应用核磁共振代谢组学方法分析食管癌患者血清代谢物[J].江苏医药，2010,36(16)：1867-1868.[8]符方方，姜苗苗，王希成，等•基于核磁共振波谱的鼻咽癌患者血清代谢组研究[J].广东药学院学报，2011,27(3)：312-315.[9]FowlerA,RappasA,HolderJ,etal.Differentiationofhumanprostatecancerfrombenignhypertrophybyinvitro1HNMR[J]・MagnResonMed,1992,25(1)：140-147.(收稿日期：2012-11-19本文编辑：卫轲)
