HBVcccDNA检测及其的临床应用慢性乙型肝炎病毒感染者血清HBVcccDNA检测的临床意义外周血淋巴细胞中乙肝病毒cccDNA检测研究H的做外周血淋巴细胞屮乙肝病毒cccDXA检测研究，并探讨其临床意义。方法采用淋巴细胞分离液分离外周血淋巴细胞，用荧光定量PCR法检测外周血淋巴细胞中cccDNA含量。结果36例CAH患者中检出29例阳性(80.56%),61例CPH患者中检出32例阳性(52.46%),59例ASC标本中检出1例阳性(0.02%)o47例健康人标本检测结果均为阴性。CAH组、CPH组、携带者及阴性对照组之间互相存在统计学差杲(卩〈0・05),携带者组和阴性对照组之间无统计学差杲。对定量资料的统计学分析显示:CAH组检测的基因拷贝数较CPH组基因拷贝数明显增高，两者具有统计学差异(P<0.05)o结论(1)cccDNA在外周血淋巴细胞屮的存在，对于慢性乙肝病毒持续感染状态的建立和维持，可能具有重要意义。(2)检测外周血淋巴细胞乙肝病毒cccDNA存在及其含量高低,可以作为评估临床抗乙肝病毒治疗有效性的一•个参考指标。(3)该检测还可用于乙肝患者治疗屮的复发及预后判断。1.DNA提取1.1外周血淋巴细胞应用淋巴细胞分离液(或红细胞裂解液)，分离外周血淋巴细胞，沉淀加入核酸提取液B50u1充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)，后loot裂解10分钟，然后13,000rpm离心3分钟，，取上清液4口1做PCR反应。乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究现状及进展H前，乙型病毒性肝炎(乙肝)是一种不能被治愈的疾病。乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)是IIBV前基因组复制的原始模板，是导致IIBV持续感染的关键因索。本文参考近几年的临床与动物实验结果，就HBVcccDXA的研究现状及进展做一综述。【关键词】肝炎病毒，乙型；共价闭合环状DNA;肝炎，慢性【中图分类号】R512162【文献标识码】A【文章编号】1007-9572ProgressinResearchofHepatitisBVirusCovalentlyClosedCircularDNALTUYan一jin,FENGLi-ying.DepartmentofGastroenterology,SecondHospitalofHebeiMedicalUniversity,HebeiKeyLaboratoryofGastroenterology,HebeiInstituteofGastroenterology,Shijiazhuang050000,China［Abstract】HepatitisBisanincurablediseaseatpresent.HepatitisBvirus(HBV)covalentlyclosedcircularDNA(cccDNA),anoriginaltemplateofHBVpre-genomereplication,isakeyfactorleadingtohepatitisBpersistentinfection.ThisarticlereviewstheresearchstatusofHBVcccDNAanditsadvancement.［Keyword］HepatitisBvirus;Covale门tlyclosedcircularDNA;Hepatitis,chronicH前尚无特效药能够治愈慢性乙型病毒性肝炎(乙肝)，乙肝的治愈主要是根除乙型肝炎病毒(HBV)前基因组R\A复制的原始模版-------------共价闭合环状DNA(covalentlyclosedcircularDNA,cccDNA)□研究cccDNA对HBV的复制以及感染状态的建立，对于乙肝的治愈具有重要意义［1］。本文就CCCDNA的研究现状及进展做-综述。1HBVcccDNA的合成和作用HBV基因组是部分双链的环状DNA分子(relaxedcircularDXA,rcDNA)。病毒侵入宿主肝细胞后，脱去外壳蛋白,rcDNA进入肝细胞核屮，在宿主DMA聚合酶的作用下，形成超螺旋结构的cccDNAocccDNA在宿主肝细胞核内积聚，形成cccDNA池(cccDNApool)。以HBVcccDNA为模板，利用R\A多聚酶II转录成前基因组mR\A(315kb)和其他mR\A(214、211、017kb),前者在核内转录后转运到细胞质，经组装进入由病毒核心蛋白及P蛋白纽成的复合体内，并以此作为反转录模板合成负链DMA,最后以负链DYA为模板，合成正链DYA,—•起组成新的HBVrcDNAo最近有研究显示,HepG212115细胞屮存在IIBV核心颗粒入核障碍，游离核心蛋白容易通过核孔，二甲基亚M(DMS0)可促进核心蛋白进入细胞核，并有助于cccDNA的形成［2］。DMS0还可加强核心蛋白的核内亚细胞定位，提高核内cccDXA的水平，为DMSO在细胞模型屮有助于HBV感染和复制的作用提供了新的解释。HBVcccDNA的产牛有3个途径。(1)复制周期内产牛：新合成的双链DNA在细胞质屮脱壳形成rcDNA,再进入细胞核重新形成cccDXA,称为细胞内通路(intracellulaTpathway)。(2)由新感染的肝细胞屮病毒颗粒产牛：双链DYA进入内质网与病毒蛋白组装成新的完整病毒颗粒，以芽牛方...