正交试验法优选真武汤的微波提取工艺[摘要]目的：优选出真武汤的微波提取最佳工艺。方法：采用微波提取方法，通过单因素实验和正交实验两者结合考察了乙醇提取浓度、提取时间、微波火力、料液比对真武汤中芍药苷得率的影响，从而优选出最优提取工艺。结果：真武汤提取工艺最佳条件为：乙醇浓度为60%，微波时间为3min，微波火力中高火，料液比为1∶10。结论：本研究将为真武汤的剂型开发等进一步研究奠定基础。[关键词]真武汤；芍药苷；微波提取；正交实验[]R284.2[文献标志码]A[]1007-8517（2015）06-0008-02真武汤出自《伤寒论》，系张仲景针对少阴肾阳亏虚，气不化水，水气内停而设。全方由炮附子、白术、茯苓、生姜、芍药等五味药组成，具有扶阳抑阴、化气行水的效果，适用于脾肾阳虚、水气内停等证，为温阳利水之经典方。后世医家对本方进行了较为系统的研究，目前已突破了水病的范围，用本方治疗多个系统的疾病，如：慢性支气管炎、肺气肿、肺心病、风心病、冠心病、充血性心力衰竭、慢性胃肠炎、肝硬化腹水、慢性肾炎、内耳性眩晕、血栓闭塞性脉管炎等疾病，疗效令人满意。该方虽应用很广，但对该方的提取工艺还未见有研究，从而也制约该方的制剂开发，故本文通过单因素及正交试验对真武汤的提取工艺作初步研究，以期能为开发该方新制剂奠定一定基础。1仪器和试剂1.1仪器WP700L17微波炉；电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；UV-VIS分光光度计（UV-2450，日本岛津公司）；高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；数显恒温水浴锅（上海浦东光学仪器厂）。1.2材料芍药苷标准品（中国药品生物制品鉴定所）；所用试剂均为分析纯；中药材炮附子、白术、茯苓、芍药购于贵阳市药材公司，生姜购于菜市场；炮附子、白术、茯苓、芍药用粉碎机粉碎得药材粗颗粒；生姜切块，备用。2方法2.1芍药苷含量得率的测定方法2.1.1标准品的制备精密称取100℃干燥恒重的芍药苷标准品4.8mg于25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得0.1920mg/ml标准储备液。精密量取0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5ml分别置于10ml容量瓶中，编号为1、2、3、4、5、6，加入甲醇定容至10ml，摇匀，甲醇做空白对照。2.1.2芍药苷标准曲线的制作将配制好的对照品溶液进行波长确定，选出最大波长，最后确定最大波长为230nm。在230nm波长处测定吸光度，以浓度对吸收值做线性回归，得出回归方程：Y=30.007X-0.0273，R2=0.9994，其中X是芍药苷标准品的浓度，Y是吸光度值。2.1.3供试品的制备准确称取按真武汤复方处方准备好的药材量的1/3（既茯苓3.00g，芍药3.00g，生姜3.00g，白术2.00g，炮附子1.40g）至250ml锥形瓶中，精密加入一定浓度的乙醇溶液后置微波炉中提取，冷却后补足失去的乙醇量，滤过，精确量取一定滤液（V），蒸发至近干，加甲醇溶解，转入25ml容量瓶中，并定容至刻度，即得供试品溶液。2.1.4芍药苷得率测定取供试品溶液于230nm波长处测定吸光度值，然后带入所得线性回归方程中计算，即可得样品中芍药苷的浓度，经进一步计算就得其得率。芍药苷得率的计算公式：得率=X×100×（25/V）×10-3/W*100%，式子中X为样品液中芍药苷的浓度（mg/ml），V为精确量取蒸发的液体（ml），W为真武汤药材总质量。2.2单因数实验2.2.1提取时间的影响分别取按处方准备好的药材量的1/6（既茯苓1.50g，芍药1.50g，生姜1.50g，白术1.00g，炮附子0.70g），各六份，混匀。按料液比为1∶15加入70%的乙醇溶液，设定微波火力为中火（P=50），微波提取时间分别为1、2、3、4、5、6min，得提取液，最后测定芍药苷的吸光度。2.2.2微波火力的影响分别取按处方准备好的药材量的1/6（既茯苓1.50g，芍药1.50g，生姜1.50g，白术1.00g，炮附子0.70g），各五份，混匀。按料液比为1∶15加入70%的乙醇溶液，设定微波时间为3min，微波火力分别为微火（P=10）、中微火（P=30）、中火（P=50）、中高火（P=80）、最大火（P=100），得提取液，最后测定芍药苷的吸光度。2.2.3料液比的影响分别取按处方准备好的药材量的1/6（既茯苓1.50g，芍药1.50g，生姜1.50g，白术1.00g，炮附子0.70g），各五份，混匀。分...