2014年12月ANHUICHEMICALINDUSTRYDec.2014交联透明质酸钠凝胶的制备周奎1，吴学森2，彭益文2，张龙军2（1.浙江工业大学药学院，浙江杭州310014；2.嘉兴凯泰生物材料有限公司，浙江嘉兴摘要：研究了以1,4-丁二醇二缩水甘油醚作为交联剂，透明质酸钠为原料，制备交联透明质酸钠凝胶。探讨了氢氧化钠浓度、反应温度、反应时间对交联透明质酸钠凝胶中残留量的影响。实验结果表明，反应最佳条件为：氢氧化钠浓度0.25mol/L，50℃反应4小时，20℃反应3天时间。此方法制备的交联透明质酸钠凝胶中交联剂残留量低于2μg/g，所需水洗时间短，产品符合YY0308-2004标准。关键词：透明质酸钠凝胶；1,4-丁二醇二缩水甘油醚；残留量：TQ464.1文献标识码：A：1008-553X（2014）06-0044-02透明质酸（HyaluronicAcid，HA）又称玻尿酸，是一种以D-葡糖醛酸和N-乙酰葡糖胺为双糖单位重复连接而成的天然高分子线性黏多糖，广泛存在于动物组织及体液中，如关节液、眼玻璃体、脐带、皮肤等。透明质酸因其独特结构而具有很好的黏弹性和优良的保水性并具有重要的生理功能和生物学作用[1]，有着很好的组织相容性和非免疫原性，因此在临床上有着广泛的应用，如透明质酸应用于眼科手术时，可起到保护眼部组织的作用[2]；治疗骨性关节炎和风湿性关节炎[3]；作为软组织填充剂，可以矫正泪沟畸形、丰唇、丰耳垂等[4]；还可作为药物载体等[5]。由于透明质酸机械强度低，易扩散，并且容易被人体内透明质酸酶所分解，存在时间短，降低了其效果为了更好地利用透明质酸的理化特性，需要对其进行修饰或者化学交联。本文采用1,4-丁二醇二缩水甘油醚作为交联剂，制备出交联透明质酸钠凝胶，不仅增强了机械性能，提高了稳定性、流变性，在体内存留时间延长，而且保有其原有的生物特性。所制备的交联透明质酸钠凝胶交联剂残留量低，符合YY0308-2004标准。1实验部分1.1仪器与试剂数显恒温水浴锅、分析天平、80目标准筛、真空干燥箱、F95s荧光分光光度计（上海棱光科技有限公司）。1,4-丁二醇二缩水甘油醚（≥95%，美国sigma-aldrich公司）、透明质酸钠（化妆品级，微生纯。1.2实验方法[6-7]用移液管移取1mL1,4-丁二醇二缩水甘油醚，加入到10mL0.25mol/L氢氧化钠溶液中，磁力搅拌5min。精确称取分子量为142W的透明质酸钠1.0g，搅拌均匀，放入50℃恒温水浴锅中，反应4小时后，转入25℃水浴中，继续反应3天时间。反应结束后，滴加适量盐酸溶液，调节pH至中性。再将透明质酸钠凝胶转移到烧杯中，加入0.2mol/L磷酸盐缓冲液50mL，室温下磁力搅拌，纯化2小时。常温下，磁力搅拌水洗透明质酸钠凝胶1天，中间换水4次。沥去大部分水分，用力挤压过80目标准筛，将交联透明质酸钠凝胶颗粒放入80℃烘箱中2小时，60℃真空干燥箱中干燥至所需质量。以1,4-丁二醇二缩水甘油醚作为标准样，用荧光分光光度计检测所制备透明质酸钠凝胶中1,4-丁二醇二缩水甘油醚残留量。1.3检测方法[8-9]精密称取80.8mg交联透明质酸钠凝胶样品（根据交联透明质酸钠凝胶样品的密度（1.01g/mL）计算所称取样品的体积）置于刻度离心管中，2000r/min离心3min，加入等体积的3mg/mL透明质酸酶溶液，放入水浴恒温振荡器中，37℃、70r/min、24小时，得到交联透明质酸钠凝胶酶解液。2000r/min离心1min，移液器移取交联透明质酸钠凝胶酶解液80μL于试管中，向试管中加入收稿日期：2014-05-23作者简介：周奎（1988-），男，在职研究生，研究方向：微生物与生化药学，18656730230，799467632@qq。周奎，等：交联透明质酸钠凝胶的制备45化钾溶液，混匀后置冰浴上10min。加入2.0mL甲酸溶液，60℃下水浴5min，随后在冰上冷却。室温下，静置15min后，用荧光分光光度计在430nm处测样品荧光值。2结果与讨论50℃时，所制备交联透明质酸钠凝胶交联剂残留量最低。在实验过程中发现，最佳反应时间为4小时。若反应时间继续延长，会导致交联透明质酸钠凝胶颜色加重最终变黄。3结论本实验采用高低温延长反应时间法制备交联透明质酸钠凝胶，以1,4-丁二醇二缩水甘油醚为交联剂，通过对反应温度、反应时间、氢氧化钠浓度条件的改变，得出最佳的反应条件，经检测所制备的交联透明质酸钠凝胶符合YY0...