祁连圆柏叶乙醇提取物挥发性成分GC―MS分析[摘要]目的采用气相色谱-离子肼质谱联用法测定分离祁连圆柏叶中乙醇提取物。方法用70%乙醇常温浸渍提取祁连圆柏叶中成分，用气相色谱-离子肼质谱仪对所得的祁连圆柏叶浸膏进行鉴定分析，色谱图用面积归一化法测定组分的相对百分含量。结果所得的质谱图采用去卷积化分析并在NIST98标准图谱库中比对检索化合物，共鉴定了12个组分，按面积归一化法计算，其峰面积比重占挥发性成分的90%。结论通过采用自动质谱退卷积定性系统（AMDIS）处理数据，增加对目标成分定性的准确性，提高色谱峰纯度，从而提高了定性的准确性。[关键词]气相色谱-离子肼质谱；祁连圆柏；挥发性成分；面积归一化法；AMDIS[]R284[文献标识码]B[]1673-9701（2013）01-0070-02祁连圆柏（JuniperusPrzewalskiiKom）[1，2]为常绿乔木，性味苦涩、微寒，可用于治疗咯血、尿血、便血等，是一种常用藏药的药源植物。近年来有研究发现[3]，祁连圆柏种子及树叶中均含有挥发性的二帖类成分，药材气味芳香，对女性卵巢癌有较好的抑制效果。另外王索安等[4]研究发现祁连圆柏提取物对人胃癌细胞SGC-7901细胞具有明显的增值抑制及诱导凋亡作用。本实验采用70%乙醇提取祁连圆柏叶子中的有效成分，采用气相色谱结合质谱分析祁连圆柏叶子中的挥发性物质，并结合标准质谱图谱库NIST98搜索并初步分析其中的成分，并希望通过初步的成分分析，为以后的有效成分分离确定及药效学工作打下基础。1材料与方法1.1材料FinnigamInnigamTraceGCUltra气相色谱仪，FinnigamPolarisQ离子肼质谱检测器、DikmaCp-sil5CB-MSFS（30m×0.25mmID×0.25μmdf）毛细管气相色谱柱，ThermoAS3000自动进样器。祁连圆柏叶子粉末药材采自青海甘肃（由浙江医学高等专科学校药学系天然药物实验室邓茂芳副教授鉴定），其他溶剂（乙醇、三氯甲烷、石油醚）均为分析纯。1.2方法1.2.1供试液提取及处理称取祁连圆柏干燥药材叶子粉末200g，置500mL圆底烧瓶中，先加入适量石油醚浸提至无色，再用70%乙醇600mL，常温浸渍3～4次至无色。浸渍液纱布过滤后，滤液用旋转蒸发仪挥发干净，得浸膏。称取约100mg浸膏用2mL三氯甲烷溶解得供试液，备用。1.2.2GC-MS条件毛细管气相色谱柱RestekDB-5，载气：高纯氦气，流速1.0mL?min-1，进样口温度：300℃，接口温度：280℃，离子源温度200℃，进样方式：不分流进样，柱程序升温：初温80℃，保持1min后，以5℃?min-1的速率升温至200℃，保持15min。进样量为1μL。从进样5min开始质谱以全扫描方式检测，扫描范围：（33～420）m/z，电离方式为EI，电子轰击能量为70eV，倍增电压1300V。其气相色谱图见图1。2结果取上述供试液，按前述“1.2.2”条件分别进行GC-MS分析。经扫描后得色谱峰的总离子流图，采用AMDIS处理GC/MS数据文件，用AMDIS对文件中每个离子的质量色谱图进行分析，对不同的峰选取1～2个模型离子（modelion），比较其他离子与模型离子峰在保留时间和峰形上的相似度，确定该离子是否归属于此峰。整个文件扫描后，将所有具有相同保留值和峰形的离子组合成一张新的质谱图，分别对新建谱图、原始谱图在NIST98谱库中进行检索，分析比较不同重叠程度对拆分结果的影响。确认各化合物；通过Xcalibur工作站数据处理系统，按峰面积归一化法计算各化合物相对百分含量。结果见表1。3讨论祁连圆柏是常用中藏药。2000年宗玉英等[5]对110种植物藏药进行了体外筛选实验，发现5种中藏药对人乳腺癌、肺癌、口腔上皮癌具有杀伤作用，但抗肿瘤机制不明，祁连圆柏是其5种之一。本实验采用气相色谱-离子肼质谱法对祁连圆柏叶乙醇提取物挥发性成分进行分析，由表可知，已鉴定的化合物占提取物总量的80%以上，已鉴定的成分占总峰面积的90%以上。在已鉴定的组分12个组分中，有多种组分是文献未曾报道过的。其中检出一种与贝母碱结构类似的物质――Verticiol（图2），其主要药效表现为镇咳也与文献报道祁连圆柏的临床运用基本一致。首次检出的桃柁酚文献报道[6]具有对金黄色葡萄球菌有很好的抑制作用。在检出的成分中包含海松酸及海松醛等成分均在松科植物的树脂（松脂）中发现过，说明柏科植物挥发性成分与松科...