HPLC指纹图谱清开灵注射液指纹图谱的ＨＰＬＣ研究撰写时间：202X年XX月XX日摘要：目的：建立清开灵注射液的HPLC指纹图谱。方法：选择NUDEOSIL-C18色谱柱(4．6mm×250mm，5μm)，流动相(A)甲醇-(B)0．5％醋酸梯度洗脱，运行时间65min，检测波长255nm，测定清开灵注射液的指纹图谱。结果：标示出清开灵注射液17个共有峰，以黄芩苷作为参照峰，得出共有峰的相对保留时间和相对峰面积，其非共有峰面积未超过总峰面积的10％。结论：方法准确、重复性好，为清开灵注射液的指纹图谱质量控制提供了依据。关键词：清开灵注射液；指纹图谱；HPLC中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(202x)04-0868-03清开灵注射液由安宫牛黄丸经拆方而来，它由黄芩苷、栀子、金银花、水牛角等7味中药提取制成，具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍的作用，用于热病神昏，中风偏瘫，神志不清等症。清开灵注射液中成分复杂，靠少数指标成分的含量测定不能全面控制质量。笔者根据中药注射剂指纹图谱研究的技术要求［1］，采用梯度洗脱法对清开灵注射液的指纹图谱进行了研究，为清开灵注射液的质量控制提供有效方法。1仪器与试剂1．1仪器岛津LC-10A系列高效液相色谱仪(含LC-10ATVP泵LC-10Ai泵，SPD-M10AVP检测器，CTO-10A柱温箱，Class-vp工作站)。1．2试剂和样品甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸水。黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所，清开灵注射液由某厂家提供的10个不同的批号，批号030304、030311、030407、030422、030425、0320210l、03202120、03202122、031011、031019。2方法与结果2．1样品的制备清开灵注射液适量，用50％甲醇稀释，并通过0．45μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液；取黄芩苷对照品适量，加50％甲醇溶解，制成含黄芩苷1μg／mL的溶液，作为对照品溶液。2．2色谱条件及分析方法色谱柱：NUDEOSIL-C18色谱柱(4．6mm×25mm，5μm)；流动相：(A)甲醇-(B)0．5％醋酸，梯度洗脱：0min：10％甲醇，50min：1％甲醇，65min：1％甲醇；检测波长：255nm；流速：1．0mLmin-1；柱温：40℃，进样量20μL。2．3方法学考察2．3．1精密度试验取同一批号供试品溶液，连续进样67次，结果表明，指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致，其相似度均大于95％，符合指纹图谱研究技术的要求。2．3．2稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，12，24h检测，结果表明，指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致，其相似度均大于95％，符合指纹图谱研究技术的要求。2．3．3重复性试验取同一批号供试品6份，按2．1项下制备供试品溶液，分别进样检测，结果表明，指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致，其相似度均大于95％，符合指纹图谱研究技术的要求。2．3．4样品测定取10批清开灵注射液，分别按供试品的制备方法制供各试液并检测，并用中药指纹图谱相似度计算软件进行了分析，以黄芩苷的色谱峰为参照物峰，其相对保留时间为41．9min。标示了清开灵注射液中17个共有峰，见图1，相对保留时间和相对峰面积见表1，相似度见图2。3讨论3．1色谱条件的选择色谱柱的选择：本实验比较了二个不同厂家的色谱柱，NUDEOSIL-C18柱(250mm×4．6mm，5μm)，PHENOMENEX-C18柱(250mm×4．6mm，5μm)，SINOCHROMODS(2mm×4．6mm，5μm)，SINOCHROMODS色谱柱的柱效较差，大多数峰不能分开，NUDEOSIL-C18柱和PHENOMENEX-C18柱的分离情况相近，综合考虑，选用NUDEOSIL-C18柱作为本实验的色谱柱。流动相的选择：本实验先采用了等度洗脱，发现用强洗脱能力的流动相时，出峰时间很早，且峰不能很好的分开，再用弱洗脱能力的流动相时，出峰少，且山峰时间太迟；故采用梯度洗脱，分别使用了乙腈-水，乙腈-0．5％磷酸，乙腈-0．5％醋酸，甲醇-水，甲醇-0．5％磷酸，甲醇-0．5％醋酸作用流动相进行线性梯度洗脱，发现用洗脱能力较弱的甲醇时峰的分离情况较乙腈好，在水相中加入磷酸或醋酸后，出峰明显增多，峰形有较大的改善，而用醋酸时的基线较磷酸时平直，综合考虑，选用甲醇-0．5％醋酸线性梯度作为本实验的流动相。检测波长的选择：本实验设定检测器从2nm～360nm波长范...