多重PCR法检测食品中的榛子致敏原王守法1巢强国2＊葛宇2柯燕娜11.华东理工大学（上海200237）；2.上海市质量监督检验技术研究院（上海200233）摘要建立了一种多重PCR法同时检测榛子磷酸葡糖异构酶、榛子致敏蛋白Cora1和Cora8三种蛋白的方法。通过琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统对多重PCR的扩增结果进行分析。结果表明本方法具有良好的特异性，检出限可达10ng/μL，且反应体系各组分未出现交叉干扰。经测序结果证实，三种扩增产物的序列与目的基因的序列高度一致，而且本方法的实样检测结果也比较理想，适合于检测食品中的榛子成分及榛子的主要致敏原。关键词榛子；磷酸葡糖异构酶；Cora1；Cora8；多重PCR：Q503文献标识码：A：UsingMultiplePCRtoDetectHazelnutAllergensinFoodWangShou-Fa1,ChaoQiang-Guo2＊,GeYu2,KeYan-Na11.EastChinaUniversityofScienceandTechnology(Shanghai200237)2.ShanghaiInstituteofQualityInspectionandTechnicalResearch(Shanghai200233)AbstractAsuitablemultiplePCRmethodwasdevelopedforthedetectionofhazelnutcytosolicphosphoglucoseisomerase,hazelnutmajorallergenCora1andCora8.TheresultsofmultiplePCRwereanalyzedbyagarosegelelectrophoresisandGelDocXRsystem.Withthismethod,thespecificturnedouttobeverygoodandthedetectionlimitcouldreach10ng/μL,besidesthis,thecomponentsofreactionsystemdidn’tshowcrossinterference.Confirmedbytheresultsofsequencing,thethreePCRproductsshowedhighconsistentwiththetargetgene,andtheresultofrealsamplesdetectionwerealsoverygood.Thismethodissuitablefordetectionofthecomponentofhazelnutandthemainallergensofhazelnut.Keywordshazelnut/corylusheterophylla;cytosolicphosphoglucoseisomerase;Cora1;Cora8;multiplePCR通常人们把对食物产生的不良免疫反应称为食物过敏[1],据统计，在西方国家有大约有3%～4%的成人和5%的儿童会对食物产生不良免疫反应[2]。由食物引起的过敏反应是导致各种不良免疫反应的主要因素，这些不良反应包括IgE介导和非IgE介导（细胞水平的）的机制，如皮肤、肠胃和呼吸道的不适症状和疾病[3]。观察发现，食物过敏是难以诊断的，即食物特异性的IgE（敏感检测）并不一定在临床上显示过敏。因此需要详细的病史结合实验室研究，且在许多情况下，需要口服食物激发才可能确诊。目前，对食物过敏的控制主要是提醒病人避免摄入相关的致敏原，及在误食致敏原后进行紧急治疗（如注射肾上腺素）。正在研究或改进的治疗方法包括口服免疫疗法、中草药疗法、抗IgE抗体研制和疫苗改造[4]。在过去的5年中，我们对基于食物的过敏性疾病的认识取得了巨大的进展。最近的流行病学研究表明，近4％的美国人都患有食物过敏症，其严重程度远高于过去所认为的水平。此外，5岁以下儿童对花生过敏的发病率在过去的5年里翻了一番[5]。现在，人们已经认识到多数食品致敏原是在分子水平上发生作用的，这促进了我们对过敏性疾病发病机制的理解，并为发明快速新颖的诊断方法和免疫疗法提供了可能[6]。为了应对日益严峻的食物过敏现象，我国也先后制定了相应的法律法规，主要包括：GB/T23779-2009预包装食品中的致敏原成分、SN/T1961.2-2007食品中过敏成分检测方法、DB11/Z521-2008奥运会食品安全食品过敏原标识标注[7-9]。近年来，随着患有花生及树坚果过敏人数的持续增长，由于这些过敏导致的各种致命的过敏反应也越来越引起人们的重视。尽管科学家们一直在尝试，却始终没有找到能够彻底治愈或者避免这类过敏反应的有效方法。当前，阻止过敏症患者接触致敏原并建立有效的致敏原检测方法是控制食物过敏的良好方法[10]。1实验部分1.1材料与仪器材料：实验收集了榛子、腰果、松子、山核桃、澳洲坚果、香榧、西瓜子、葵花籽、大麦、核桃、黑芝麻、白芝麻、燕麦、玉米等十几种样品及四种深加工标注含有榛子的市场样品。所有样品均购自当地超市及大卖场。样品用液氮在研钵中磨细后放入冰箱内备用。仪器：AB135-S电子天平瑞士MettlerToledo公司；SW22震荡水浴槽北京优莱博技术有限公司；Centrifuge541...