乳糖化修饰性壳聚糖纳米粒抗肿瘤药效学及吸收机制研究贝永燕许静玉王文娟张学农（苏州大学医学部药学院，苏州215123）摘要：目的制备一种纳米粒制剂:乳糖化去中基斑螯素壳聚糖纳米粒（Lactosyl-norcantharidinloadedgalactosylatedchitosannanoparticles,Lac-NCTD-GS-NPs）,运用抑瘤实验研究制剂的抑瘤效果，并采用Caco-2细胞模型来研究其转运机制。方法通过碳二亚胺缩合法合成了N・乳糖酰壳聚糖，进一步采用离子诱导法制备纳米粒。建立H22肝艾细胞小鼠荷瘤模型考察药物及共制剂的体内抗肿瘤活性。还建立并验证了Caco-2细胞模型，比较了不同浓度纳米粒的转运惜况。结果纳米粒各剂量组对生理盐水对照组均有显著性差异（p<0.01）,抑瘤效果显著；高、中、低3个浓度纳米粒的跨Caco-2细胞单层转运均为基地侧（BL,Basolateral）-1肠腔侧（AP,Apical）的Papp值〉AP侧-*BL侧的Papp值。结论体内抗肿瘤实验表明纳米粒制剂能冇效地抑制出2肿瘤的生长；壳聚糖纳米粒主要通过主动转运穿过小肠上皮细胞。关键词：乳糖化修饰性壳聚糖，乳糖化去甲基斑螯素，主动肝靶向，纳米给药系统，药效学研究中图分类号：R965；R966文献标示码：A1基金项目：国家大学生创新性实验计划资助（项目编号：091028524）。作者简介：贝永燕（1987・）,女，硕士。E-mail:beiyongqing@163.com；Tel:13771906922；张学农（1962・），通讯作者，教授，博士生导师，主要研究方向：药物新技术与新剂型。Tel/Fax（0512）65880030；E-mail:zhangxuenong@163.com；Tel:（0512）65882087。0引言纳米粒是当前药剂学研究的新型亚微粒给药系统，具有靶向性给药，改变药物体内分布，调节释药速度，改善药物口服吸收，提高生物利用度，降低药物毒副作用等优点，已成为国内外药剂学研究的热点领域W本章通过碳二亚胺缩合法合成N-乳糖酰壳聚糖，离子诱导法制备了纳米粒。纳米粒制剂可被肝细胞的去唾液酸糖蛋白受体特异性识别，达到药物在体内主动肝靶向识别和作用，达到高效、低毒的作用。Caco-2细胞来源于人的结肠癌细胞，体外培养一定时间后能够分化具有小肠微绒毛结构，并表达多种药物载体和酶，已被广泛应用于药物摄取、转运与代谢研11.[4]1仪器与材料1.1仪器全自动定量绘图酶标仪（ModelELx808,Bio-TckIntrumcnts）。LC-10A高效液相色谱系统（SPD-M10A紫外检测器，SCL-10A系统控制器，CR-10A数据处理机，日本岛津公司）；色谱柱：ODS-Cis柱（4.6mm><250mm,5pm,大连依利特科学仪器有限公司）。1.2试药N—乳糖化壳聚糖，乳糖化去甲斑螯素（Lac-NCTD,由实验室合成，纯度98.34%）；壳聚糖（Mw8〜10kDa,脱乙酰度：91.2%,粘度：2.95mPa.S）；其它试剂均为分析纯。13动物C57BL/6小鼠（20土2）g,雌雄各半（苏州大学实验动物中心）；小鼠肝癌细胞H2“复旦大学生物细胞库）；Caco-2细胞（复旦大学生物细胞库）。2方法2.1两种纳米粒的制备与表征〔呦运用N・二亚胺缩合法制备N蜉L糖酰壳聚糖；采用乙二胺为连接臂将去甲斑螯素和乳糖酸连接合成乳糖化■去甲斑螯素前体物（lactosyl-norcantharidin,Lac-NCTD）。称取N・乳糖酰壳聚糖O.lg,溶解于0.2%的乙酸水溶液小，加入适量Lac-NCTD后，置35°C水浴中，4000Xg搅拌溶解，逐滴加入1.2mg・ml?的TPP水溶液，继续搅拌30min,0.45pm滤膜过滤，得乳白色纳米粒溶液。运用红外光谱（FT-IR）和透射电镜对纳米粒进行表征。2.2原料药和制剂的肝肿瘤抑制作用对比肿瘤细胞传代培养7d后，选取接种肿瘤后第7天的乳白色腹水，用生理盐水稀释为细胞浓度为IX10-7个.011/。于每只实验小鼠右侧腋部皮下接种0.1mLlOg^o接种后小鼠随机分成不同的实验组（生理盐水组；NCTD组；Lac-NCTD高剂量组；Lac-NCTD中剂量组；Lac-NCTD低剂量组、Lac-NCTD-NPs高剂量组；Lac-NCTD-NPs中剂量组；Lac-NCTD-NPs低剂量组），每组10只。次FI起每FI定时腹腔注射给药1次，连续给药8血给药结束次日，将何组动物称重处死，剥离出皮下肿瘤称取重量。以抑瘤率的大小判断对肿瘤的抑制作用。2.3Caco-2细胞模型研究不同浓度纳米粒对转运的影响⑺细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基于75cm?卡氏培养瓶中进行传代培养（3?°c,5%CO2）c两天换一次培养液，...